Forskolin的功能与作用

 

  可以使膜，细胞或组织制备液中cAMP含量上升。Forskolin 不仅可以活化AC 而且可以与某些其它蛋白相互作用，包括葡萄糖转运蛋白和离子通道。Forskolin能够促进9种不同独立AC形式的活化，虽然对AC9效率有点低，这可以用于提供一种鉴定和量化G蛋白 (Gs)–AC复合物高亲和性结合位点的方法。G蛋白偶联受体活化G蛋白有助于细胞中Forskolin刺激的cAMP 产生，因为 G蛋白-Forskolin对AC活性有增强作用。

 

  Forskolin的细胞内浓度由两个细胞膜上的酶调节，促进 ATP 合成 cAMP， 而磷酸二酯酶把 cAMP 降解成 AMP。cAMP 的激活是由不同的 GTP 结合蛋白偶联受体受体（GPCR）和 GTP 结合蛋白（Gs 或者 Gi）相互 作用而调节。蛋白是由 Gα （i 或者 s） 、Gβ 和 Gr 组成的异源三聚体GPCR 激动剂使 GTP 和 Gα 结合，产生构象变化，导致 Gα 与 Gβ γ 分离.分离后，Gα s 主要与 AC 激活有关，而 G α i 则是抑制 AC 活性。测量胞内 cAMP 是检测化合物对 GPCR 介导的 AC 活性的激活或者抑 制作用的理想方法。细胞制备，细胞长到 70%的时候， 用不含钙和镁离子的 PBS 洗一次， 然后用 5mM EDTA(PBS 配制成的)37 度消化 5min，275g 离心 10min.HBSS 1X 重悬，计数，275g 离心 5min.用 stimulation buffer 重悬细胞，按 6*105 个/ml 的浓度稀释细胞（3000/孔） 分析步骤 1 Gα s 受体分析 cAMP 标曲 Gα i 受体分析 cAMP 标曲 目的 确定 cAMP 分析的敏感性 （IC50 值）和动态范围 （IC10-IC90） 。确定zui大分析窗的*细胞 浓度，对于 Gα i 分析，确定 Forskolin 的 EC90 以用于激动 剂分析。