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牛血清白蛋白在免疫检测过程中起到什么作用

更新时间:2019-05-28      点击次数:4374
       在免疫检测过程中,需要将抗体固定在固相表面,如微孔板,磁颗粒、聚苯乙烯微球或硝酸纤维膜表面。由于蛋白是一种粘性较大的分子,检测过程中,样本中的杂蛋白会与固相表面的疏水位点发生非特异性结合,造成背景干扰。因此,需要将固相表面的多余位点用封闭剂将其封闭,常用的封闭剂,如BSA、酪蛋白、明胶等能够吸附在固相表面,防止抗体、或者抗原与固相表面发生非特异性结合,降低检测本底,提高灵敏度。
  牛血清白蛋白是一种球蛋白,分子量约为66.5kDa,表面含有大量的氨基和羧基残基,并且BSA的空间结构能够随着温度、pH、盐浓度发生变化,是一种柔性分子。作为常见的封闭蛋白,BSA能够与亲水表面、疏水表面,以及活化的共价结合表面,如活化羧基、氨基、环氧基、甲苯磺酰基等结合,抑制非特异性吸附,是一种理想的固相封闭剂。
  牛血清白蛋白表面含有大量的羧基、氨基,能够用于表面的活化基团结合,封闭多余位点,为常见的是化学发光免疫磁珠偶联抗体当中的应用。如用EDC活化羧基表面磁珠后,能够和抗体表面氨基反应,使抗体共价结合在磁珠表面。这一过程需要对多余的活化羧基位点进行封闭,BSA分子尺寸更小,能够进入到表面抗体间的间隙,并且由于表面含有大量的氨基,与活化羧基反应,封闭多余的活性位点。同时,BSA表面含有大量的羧基,还能够改善磁珠的亲水性。另外,BSA表面含有一定的氨基酸疏水残基,如丙氨酸、亮氨酸等,也能够对表面的疏水位点进行封闭。
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