如何利用牛血清白蛋白测定蛋白浓度？

　　牛血清白蛋白（BSA）在生化实验中有广泛的应用,一般作为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，稳定酶活性，并可防止酶的分解和非特异性吸附；ELISA、WB中也常常用到，比如封闭液，样本稀释液，酶结合物稀释液都可以用BSA；蛋白定量时作为标准物；酶活测定反应中作为阴性对照；血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用，在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

　　BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体”作用，不少酶类添加BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言，BSA可以使酶切更*，并可实现重复切割。在37℃，酶切反应超过1h时，BSA可以使酶更加稳定，因为在不含BSA的反应缓冲液中，许多限制性内切酶在37℃下只能存活10~20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质。

　　测定蛋白浓度

　　按50：1配置工作液。10ul蛋白标准液+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。再分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中，在其他样品孔中加入10ul待测样品。分别加PBS定容至20ul。各孔中加入200ul工作液，室温放置2小时。用酶标仪测定蛋白浓度，依标准曲线算出蛋白浓度。