组化作为基础的免疫学实验,每个小步骤中却包含着决定成败的技巧,这些你都知道吗,就让小编总结下给到你吧。
1.固定: 很好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片,甲醛固定有时比冰冻丙酮好;但对于不同的组织和抗原,可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液,请于购置前注意说明书。
Bouin S固定液:饱和picric acid750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其对组织的穿透力较强,固定较好,结构完整,但因偏酸,对抗原有一定损害,且组织收缩明显,不适于组织标本的长期保存。
PLP液:即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛,适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2.组织脱水,透明:时间不能太长,否则在切片时容易碎片,切不完整。
3.切片时展片:有些组织在切片后难以在水中展开,这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
4.烤片:60℃ 30分钟或37℃ 过夜,温度太高或时间太长,抗原容易丢失。
5.蜡块及切片的保存:在4℃保存较好
6.脱片问题:Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化 染色工作中常用的一种防脱片剂,6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液,适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行,可用双重处理(APES和Poly-L-Lysine)的切片。在以上两种条件都行不通的情况下,可用如下方法:切片在脱蜡前,放在APES 1:50 丙酮溶液中浸泡3分钟,晾干,即可进行下一步。
7.灭活内源性酶:HRP系统:3%双氧水灭活;AP系统:3%HAc灭活。
8.暴露抗原:对于石蜡切片的免疫组化实验 时,必须采用高温加热抗原修复,这将有助于暴露抗原决定簇,从而增加免疫组化染色的强度(不同抗体的比较好的佳修复液请参阅抗体说明书)。对于不同的组织,不同的抗原,不同的抗体,所采用的方法应不一样,可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。
9.封闭:在山羊血清封闭,非特异性染色仍然较强时,可延长封闭时间或用浓缩血清封闭
10.抗体稀释:应遵循“现用现配”的原则,对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。
11.背景高:在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下,如果背景依旧高,可采用含1‰ Tween20的PBS洗,特别是在显色之前要多洗。
12.返蓝:在苏木素复染后,可用碱性缓冲液(如PBS)或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。
13.显色:一定要在显微镜下观察,注意控制背景。
14.在整个操作过程中,切片千万不能干燥,否则会有非特异性染色。
以上就是免疫组化各个步骤中包含的需要注意的细节,看完是不是对你有所启发呢,AG8亚国服务5月*正在火热进行中,涵盖多条产品线的比较常用试剂,2件8折,5件75折,更有可爱的玩偶相赠,也包含IHC基础产品线产品,快来看看吧!
培养线:
货号 | 品名 | 规格 | 目录价 |
abs974 | 胎牛血清(标准级) | 125/500mL | 683/2541 |
abs975 | 胎牛血清(标准级),辐照 | 125/500mL | 746/2751 |
abs972 | 胎牛血清(优级) | 125/500mL | 935/3465 |
abs973 | 胎牛血清(优级),辐照 | 125/500mL | 998/3675 |
abs9412 | Serum-Free干细胞冻存液 | 100mL | 1943 |
abs9413 | Serum-Free细胞冻存液 | 50mL/100mL | 903/1712 |
abs80002 | 鸡胚提取物 | 10ml | 2500 |
abs9119 | Bovine Pituitary Extract (BPE) | 10mg/25mg | 1820/2700 |
常规常用:
货号 | 品名 | 规格 | 目录价 |
abs9187 | 二甲基亚砜(DMSO)(细胞培养级) | 50ml | 189 |
abs955 | 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒 | 50tests | 2625 |
abs957 | 即用型高效免疫组化二抗试剂盒 | 5ml | 2000 |
abs930 | ficoll | 50ml/100ml | 262/420 |
abs9156 | 牛血清白蛋白(BSA,cell culture) | 50g/100g | 735/1155 |
abs9157 | 牛血清白蛋白 (BSA) | 100g | 525 |
abs9169 | Insulin, from Bovine Pancreas | 25/100/500mg/1g | 231/683/2604/4515 |
abs42019847 | Insulin(重组人胰岛素) | 100mg/1g | 1400/9600 |
abs50002 | 中性粒细胞呼吸爆发检测试剂盒 | 25T/50T/100T | 2000/3200/5000 |
abs80001 | 霍乱毒素B亚单位 | 1mg | 2200 |
abs9118 | Proteinase K | 100mg/1g | 188/1600 |
abs9122 | Surfactin | 10mg | 3950 |
abs47014828 | Hygromycin B | 1g/5g/10g | 750/3840/6144 |
abs50001 | Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒 | 50T/100T | 1050/1838 |
abs920 | ECL化学发光检测试剂盒 | 2*250ml | 1155 |
abs922/923/924 | 预染蛋白marker | 500ul/5*500ul | 询价 |
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Absin特色产品线: WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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