细胞培养一站式解决方案之细胞消化

AG8亚国服务提供细胞培养一站式解决方案，培养基、培养基添加物、培养耗材、细胞检测……

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一般细胞长至80%-90%密度则需要传代消化，贴壁细胞传代前，需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来，细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内。

细胞消化常用方法

酶消化法

胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。

0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。

离子螯合剂

不破坏细胞表面分子，仅与CAMs螯合，因此，如果检测细胞表面分子的话，尽量，甚至是一定不要用酶消化法。

EDTA。一般浓度在0.02%左右。作用于细胞与间质，对细胞间也有一定作用。注意，它能显著影响pH值，而且在弱碱性条件下才易溶。因此，配制时应调节好酸碱度。它不能被终和。因此，消化下来的细胞要洗一遍。

物理法

直接吹打或用细胞刮子将细胞刮下来。

细胞消化液

AG8亚国服务细胞消化液使用原料为基因工程方法生产的胰蛋白酶，无动物源性，无病毒污染可能性，且内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。可以替代动物源性胰蛋白酶。可用于哺乳动物细胞、间充质干细胞等原代细胞。

使用方法：

1、在显微镜下观察细胞 ，当细胞融合度达到 90%，即可传代。

2、在超净台/安全柜中，吸走培养瓶中旧的培养液，加入 PBS 溶液洗一次，加入细胞消化液使之*覆盖皿/瓶底。

3、室温孵育 4-5 分钟或 37℃孵育 2-3 分钟（不同细胞类型消化时间略有差异），显微镜下观察到大 部分细胞边缘开始脱离皿/瓶底。

4、加入与消化液等倍体积细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未*脱离的细胞，并轻轻吹打混 匀，使细胞*分散。

5、将细胞悬液转移到离心管中，1200 rpm 离心 3 min。

6、弃上清，加入对应细胞培养液，重悬细胞，按比例进行传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于 37℃， 5%CO2 条件下培养。

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