呼吸爆发检测试剂盒的原理及操作方法

　　呼吸爆发（respiratory burst）是指在激活的髓系细胞，如中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞等，受到刺激后大量释放以氧化细胞代谢产生过程中的超氧阴离子等活性物质，从而维护机体抵御外界侵略因素的能力。而呼吸爆发检测则是评估和监测机体免疫、炎症和感染状态的一种方法。现代科技的发展使得呼吸爆发检测可以通过检测试剂盒快速、准确地完成。

　　呼吸爆发检测试剂盒广泛应用于临床、研究和实验室等领域，用于以下方面的检测：

　　1.免疫缺陷病变的早期发现

　　2.炎症反应的评估

　　3.感染状态的检测

　　4.寻找急性肥厚性髓样细胞白血病等疾病的鉴别诊断

　　5.研究呼吸爆发与细胞免疫关系的科学问题

　　目前常用的呼吸爆发检测试剂盒是基于激活后的髓系细胞释放产物的颜色变化或荧光变化来测量呼吸爆发的活跃程度。其原理可以分为两种：比色法和荧光法。

　　比色法原理：在具有呼吸爆发能力的髓系细胞受到适当激动剂的刺激后，需要内源性的NADPH氧化酶（NOX）介导合成超氧阴离子（O2-）。比色法检测过程中，NOX会将非荧光底物OXID（2,3,5-三苯基四氮梯）还原成荧光有机化合物REDF（2,7-二叔丁基-4,5-二苯基-1,2,4-三唑-3-硫醇）。产生的荧光可被荧光仪测量，其强度与NOX活性相关。

　　荧光法原理：荧光法同样是基于NOX产生的超氧阴离子，但是其鉴定物质不同，常用的鉴定荧光物质是二苯基巨环（dihydropyridine，DHR）。荧光素自身不惰性，在被刺激后会被转化为惰性化合物。DHR在被NOX还原后，会变为高荧光的氧化物（oxiDHR），其强度也会被荧光仪检测到。

　　呼吸爆发检测试剂盒的操作方法

　　虽然有些不同种类的呼吸爆发检测试剂盒在操作过程中有不同的步骤和条件，但大致操作流程可归纳为以下几个步骤：

　　1.收集患者或实验室动物的血样。血样需要防止血凝块形成，如使用抗凝管或具有抗凝剂的收集器。

　　2.加入合适剂量的呼吸爆发刺激剂。刺激剂被认为对不同细胞类型的激发程度不同，需要根据检测对象选择刺激剂。

　　3.加入比色剂或荧光剂，随后等待适当时间，直至出现荧光变化或颜色变化。

　　4.使用相应的电子设备（比如荧光测量仪）读取数据，据此评估呼吸爆发的程度和活跃性。