类器官培养常见问题汇总

Q1：类器官和肿瘤球有什么区别？

A1：类器官中多种不同类型的细胞，可以在体外自我分化自我组装，具有干性可以进行传代；肿瘤球只有单一细胞。

Q2：如何避免原代培养中的污染问题？

A2：动物源性的样本一般比人源的更容易污染，尤其是一些胃肠、泌尿系统，培养过程可以添加一些庆大霉素或者抗生素。

Q3：药筛常用的指标有哪些？

A3：一般IC50用的比较多。

Q4：为什么类器官不会缺少营养？是因为长在基质胶里吗？

A4：因为类器官中有多种细胞类型，并且是一个腔状的结构，所以不会吸收不到营养。

Q5：组织来源的类器官和ipsc的有什么区别？组织的大小和体积有什么要求吗？

A5：组织的大小建议黄豆大小；IPS主要是干细胞诱导的，周期比较长，优点在于纯度比较高，但是一般不能传代。

Q6：类器官和肿瘤球哪个在药筛中使用更广泛？

A6：类器官做药筛是目前的一个新的趋势，后续应用会更广泛一些。

Q7：类器官培养到什么时候可以加药？

A7：一般建议是长到200-300um可以加药，传代的第2代或者第3代。

Q8：IC50与临床用药浓度有什么联系？IC50的用途

A8：IC50 主要是对药物敏感性的判断，与用药的浓度是有一定关系的。

Q9：类器官药筛中是如何选择药物的？浓度范围多大？

A9：举例：如果是检测化合物，化合物中都有IC50值，我们直接扩大1000倍。

Q10：PBMC和类器官共培养还需要添加基质胶吗？

A10：可以加基质胶，也可以不加。

Q11：药筛怎么做正常组织类器官对照？

A11：用DMSO做对照即可。

Q12：类器官培养冻存后一般可以传几代？冻存需要有特殊的细胞冻存液吗？

A12：主要看类器官的干性，干性比较好可以传20代以上；冻存液需要类器官专用的无血清冻存液。

Q13：类器官培养2-3天直径可以达到多少？

A13：主要看类器官生长的情况，一般是100-200um.如果类器官初始体积就比较大，直径会更大一些。

Q14：组织养成的类器官多次传代，可以用于提出肿瘤原代细胞吗？

A14：原理上是可以的，把基质胶铺薄一些让其贴壁，再把培养基换成常规血清培养基。

Q15：组织提取的原代细胞只能传代3-5次，为什么类器官可以传很多次？

A15：因为原代细胞是单一细胞系，一些增殖的基因会起到抑制作用，但是类器官中是有干细胞的，每一代的类器官中都有一些具有干性的原代祖细胞，所以可以一直传代，而且类器官的培养基可以保持细胞干性，抑制其分化能力。

Q16：加药后如何判断药物敏感性？用哪些方法检测？

A16：一种是观察明场图片，另外就是终点法，像比较常见的CCK8、ATP细胞活性检测、活死染色法也可以。

Q17：检测IC50一般采取什么方法？

A17：比较常见的是CCK8检测、ATP细胞活性检测、活死染色法。

Q18：做实验选用第几代的类器官比较好？

A18：建议3-5代是比较好的。

Q19：类器官怎么计数？

A19：常规显微镜4倍镜下进行计数即可；另外可以用细胞计数仪进行计数。

Q20：类器官直径多大是可以加药？第几天可以测ATP

A20：200-300um;建议是在加药后120小时以上。

Q21：老鼠人源肿瘤肺转移模型可以做类器官吗？

A21：这种属于肿瘤球构建。

Q22：类器官传代怎么消化？

A22：有专用的类器官消化液，还可以借助一些机械的消化手段，一般是1-2min,千万不要用胰酶消化。

Q23：原代消化建议多长时间？

A23：用我们AG8亚国服务的消化液是10-15min,常规文献中的要根据不同组织类型去判断。

Q24：类器官可以分泌外泌体吗?

A24：可以的，但是纯度是不一样的。

Q25：很多药物对类器官的渗透深度有限，如何保证可以进入到200- 300um深层的位置？后续染色pi染色可以渗透到最内的深度吗？

A25：药物并一定要渗入到深层，作用一部分的就会起作用，因为类器官之间是相互作用的，这一点区别于肿瘤球，主要是肿瘤球中间是没有缝隙的。

Q26：不同器官来源的类器官形态差别大吗? 都是腔状结构吗?

A26：差别比较大的，每个类器官的形态都是有一定的区别。

Q27：加药后展示变化明场图片一般时间间隔多久要拍一次？

A27：建议每2天拍一次，培养过程多进行观察，有条件可以每日观察。

Q28：如何在药筛过程中保持孔间一致性？

A28：每个孔建议是50个类器官，因为类器官没有办法计数，所以每个孔多少还是会有差距。

Q29：类器官可以直接在基质胶里染色吗？

A29：不建议这样操作，建议把类器官悬浮在缓冲液或者培养基中进行染色。

Q30：肺癌类器官一开始是腔状的，后面越长越实是正常的吗？

A30：是正常的。因为肺在长过程是会有一个M1型到M2型的转化的。

Q31：离心提高到300g下不来如何处理?

A31：不同厂家离心力不同，提议自己摸索实验室转速，适当提高。