我们辛辛苦苦养好的类器官,该如何做鉴定呢?通常是HE染色和免疫组化染色。今天小编带大家了解一下类器官如何进行包埋及HE染色。
一、类器官收集
1、类器官收集(例如24孔板,收集1-2孔类器官,大约200-500个类器官);
2、4℃静置 10min,离心弃去大部分上清。
二、琼脂糖凹槽制备
1、称量0.2至0.4g琼脂糖,加入至烧杯或者小试剂瓶内;
2、加入10mL左右PBS;
3、微波炉高火融化,每隔5s暂停打开,观察,重复数次至琼脂糖融化;
4、取约200uL融化琼脂糖,加入至600uL 1.5ml EP管内(如下图所示);
5、在盛有琼脂糖的1.5ml EP管内插入一小0.5ml EP管,使琼脂糖形成一圆尖底凹槽,室温或者4℃冰箱静置数分钟,至琼脂糖凝固,轻轻转动小0.5ml EP管,取出0.5ml EP管,可看到琼脂糖内形成一个深圆尖底槽;
6、吸取类器官沉淀置于凹槽底部,尽量包埋在中间位置;
7、加入PBS至高于琼脂糖槽的边缘。
三、类器官固定
四、类器官包埋
1、脱水:取出已凝固的含有类器官沉淀的琼脂糖块,在梯度乙醇中脱水,70%、80%、90%和95%乙醇各1h,100%乙醇30min,待其凝固;
2、融蜡:提前4h左右打开烘箱,65℃溶蜡;
3、透明:将脱水完成后的琼脂糖块转移至组织包埋盒中(二甲苯处理前需一直浸泡在无水乙醇中),将包埋盒转移至二甲苯中5min处理两次;注:因二甲苯有毒性,需在通风良好区域进行操作,取出时尽量沥尽残留二甲苯;
4、浸蜡:透明化处理完成后立即转入已经融化的蜡缸中,60℃浸蜡2h后,更换新的蜡缸再次浸蜡2h;
5、包埋:包埋在冰盒上进行,将融好的纯蜡倒入蜡盒三分之一处,将琼脂块放置于中间位置,然后再滴蜡包埋直到倒满。待蜡块凝固后,小心脱下模具。
五、类器官HE染色
1、石蜡切片脱蜡至水
依次将切片放入二甲苯I 10min;二甲苯Ⅱ10min;无水乙醇Ⅰ5min;无水乙醇Ⅱ5min;95%酒精5min;90%酒精5min;80%酒精5min;70%酒精5min;蒸馏水洗。
2、苏木素染细胞核
切片入Harris苏木素染3-8min,自来水洗。
3、伊红染细胞质
切片入伊红染液中染色1-3min,自来水洗。
4、脱水封片
将切片依次放入95%酒精I 5min ;95%酒精II 5min;无水乙醇Ⅰ5min ;无水乙醇Ⅱ5min ;二甲苯Ⅰ5min ;二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
5、显微镜镜检,图像采集分析
六、类器官鉴定-HE染色结果(以肺癌为例)
人肺癌类器官HE染色
今天讲解就到这了,大家如有类器官包埋及HE染色问题,欢迎交流哦!
货号 | 品名 | 规格 |
abs44056210 | 琼脂糖 | 100g |
abs42155596 | 石蜡 | 500g |
abs962 | 1×PBS缓冲液 | 500ml/500ml*10 |
abs9222 | 伊红染液 | 100ml |
abs9214 | 苏木素染液 | 100ml /500ml |
abs9177 | 中性树胶 | 100ml/ 100ml×10 |
abs7119 | 1.5ml离心管(无菌无酶) | 1袋/箱 |
abs7118 | 0.5ml离心管(无菌无酶) | 1袋/箱 |
abs9444 | Organotial人肝癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9445 | Organotial人结直肠癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9443 | Organotial人肺癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9449 | Organotial人胃癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9447 | Organotial人胰腺癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9589 | Organotial人鼻咽癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9446 | Organotial人乳腺癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9558 | Organotial人卵巢癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9590 | Organotial人宫颈癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9448 | Organotial人子宫内膜癌类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9739 | Organotial人脑胶质瘤类器官培养基试剂盒 | 1kit |
abs9743 | Organotial人前列腺癌类器官培养试剂盒 | 1kit |
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