细胞养得好，血清有门道

血清是细胞培养的必要成分之一，胎牛/新生牛/小牛/成牛种类繁多，加上市场上各种品牌，让细胞小白挑花了眼，小爱围绕以下问题带您一站式了解。

✦ 血清为何对细胞状态影响如此之大？
✦ 血清到底如何挑选？
✦ 絮状物、沉淀、过滤、灭活等使用常见问题？
✦ 细胞出现问题如何判断是否与血清有关？

一、血清为何对细胞状态影响如此之大？

血清中含有多种已知和未知的成分，主要包括：蛋白质和多态、多种因子、氨基酸、激素、其他微量元素及不确定成分。其中生长因子促进细胞增值，附着因子促进细胞贴壁并具有抗胰酶活性，各种蛋白质可提供细胞生长所必需的营养物质，矿物质、脂类及激素也可以结合于血清的蛋白质中，由此可见血清在细胞培养过程中十分关键，其本身存在多种未知成分，采血时间差异，批次之间差异等，综合决定了血清对细胞状态的影响程度。

根据动物来源不同，血清可分为马血清、牛血清、猪血清，还有羊、鸡、兔等动物来源的血清，根据采血时间、血缘品质又分为不同类别，加之不同工艺的加工，市面上可见的血清种类繁多。

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通常马血清用于神经细胞的培养，猪血清用于疫苗生产，新生牛作为乳制品产业中的副产品，其血清产量更高、效益更好，适用细胞范围也更广。

为什么胎牛血清比新生牛血清贵？随着胎龄的增长，补体系统逐渐发育，各种生长因子逐渐减少，进食后的小牛血清中IgG含量增多，使血清随着采血时间后移质量相对下降，而且每头胎牛仅能获得约500ml血清，种种因素使得胎牛血清成为细胞培养的血清，价格也相对更加昂贵。为了满足不同实验需求，产生了适合外泌体研究的去外泌体血清，适合脉冲示踪实验的透析胎牛血清等等，而不同的生产工艺产生了特级、优级、标准级血清。

牛血清根据采血时间不同分类表

判断血清质量的四个指标：依据《中国生物制品主要原辅料质控标准2000年版》

✦ 有害微生物，不能含有牛腹泻病毒，不能被噬菌体、支原体、真菌污染；
✦ 内毒素，不应高于10 EU/ml；
✦ 总蛋白含量，3.5%~5%（w/V），过高可能是由于采血时间较晚，过低血清可能被人为稀释；
✦ 血红蛋白，从一定程度上反映了采集流程的规范程度。不应高于0.02% (w/V)。

此外还流传着通过颜色判断血清质量的方法，小爱认为不够科学，血清颜色由是血红蛋白（红）和胆红素（黄）决定，胎牛尚未发育好，因此其凝血功能不完善，所以采集血清时溶血不可避免，根据血红蛋白是否超标来判断采血过程的规范性更为精准。

二、絮状物、沉淀、过滤、灭活等使用常见问题？

我们推荐大家养成先4℃解冻，室温或37℃融解的方法，由于蛋白质等干物质的融解速度大于水这类溶剂，所以我们在血清融解过程中最好多次混匀，避免大量蛋白融于极少部分水，而产生蛋白沉淀。

如果融解血清时出现沉淀也不要着急，产生的沉淀多为脂蛋白和纤维蛋白，血清中这些物质的含量远远高于细胞生长需求，所以并不影响后续细胞培养效果，血清打开后分装使用，避免反复冻融可以降低出现沉淀的概率，遇到血清沉淀的情况我们可以尝试延长融解时间或者离心去除沉淀。

血清融解产生的沉淀（图片来源于网络，仅供学习使用）

此外血清在生产时经过多次过滤除菌，有些血清还经过辐照灭菌，所以在一般无需过滤。热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要，补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出，其他的补体成分也很少。

三、细胞出现问题如何判断是否与血清有关？

主要看是否更换了新批次的血清，不同批次的血清成分可能有一定程度的改变，所以推荐购买血清时多囤几瓶同批次的，更换批次后，一定要注意观察细胞状态。

四、血清批间差会造成细胞哪些改变呢？

主要表现为增长变慢，细胞边界不清，形态改变，空泡化，贴壁能力减弱，漂浮，凋亡增多等。

血清批间差造成的细胞聚团、形态改变、空泡化

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