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EAE疾病模型│百日咳毒素使用注意事项及文献分享

更新时间:2024-01-29      点击次数:508

微生物制剂可加重炎症性疾病,如多发性硬化症(MS),该疾病研究常用的动物模型为实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。百日咳毒素(PTX)是微生物制剂的一种,它是一种细菌毒力因子,通常被用作促进EAE的佐剂

 

需要注意的是,EAE模型诱导的成功率受多种因素的影响,包括小鼠的种类和性别、百日咳毒素的剂量、佐剂的使用以及丰富的实验基础和建模经验。此外,在特定应用中,每个批次都要确定最佳剂量。

 

保存和溶解方法:

 

保存:我司提供的百日咳毒素为无菌包装的冻干粉,在真空下密封。重溶前后在4°C下可储存6个月,避免冻融;

 

溶解:百日咳毒素溶于水,可用无菌水或无菌缓冲液重溶。使用前,应轻柔摇晃,使悬液混合均匀。如果需要长期储存,可以在高离子强度缓冲液中进行重溶,如无菌0.1M磷酸钠溶液、pH 7.0;0.5M氯化钠溶液(注意:溶解时轻柔处理,不要进行剧烈漩涡震荡)。

 

EAE模型文献分享:



 

在百日咳毒素作为佐剂促进EAE模型的机制探究中,Aline Dumas等人曾报道,PTX会触发IL-6介导的信号级联反应,通过在血管内表面爬行来增加巡逻血管的白细胞数量。随后,Aline Dumas等人又进一步发现PTX通过其ADP核糖基转移酶活性诱导:

1)髓样细胞中的TLR4信号传导,导致促IL-1β合成;
2)一种依赖pyrin的炎性复合物,将促IL-1β裂解为其活性形式。然后,IL-1β刺激附近的基质细胞分泌IL-6。

 

在没有pyrin的情况下,PTX不会诱导中性粒细胞与大脑毛细血管的黏附,并且在诱导具有脑源性T淋巴细胞小鼠的EAE方面效果较差。该研究确定了激活pyrin的第一个微生物分子PTX,感染后可能影响MS的机制,也是免疫疾病的潜在治疗靶点。

 

EAE诱导实验方法:

 

1、主动免疫诱导EAE

 

1)小鼠两侧皮下注射200μL乳剂。乳剂中含有300μg MOG(35-55)肽(溶解于生理盐水中),并与等量的FCA混合;

2)免疫后即刻和免疫后第2天分别给予小鼠腹腔注射PTX(20μg/kg)。

 

2、通过过继转移诱导EAE

 

1)给小鼠腹腔注射2×107个从免疫诱导EAE后8天处死的小鼠腹部淋巴结和脾脏中分离的淋巴细胞;

2)然后在补充有MOG(35-55)肽(15μg/mL)、小鼠IL-12(5ng/mL)、小鼠IL-23(20ng/mL),FBS(10%)、1%改良的Eagle培养基(含非必需氨基酸)、青霉素(100U/mL)、链霉素(100μg/mL)和两性霉素B(250ng/mL)的DMEM培养基中培养2天。

 

3、EAE症状的评估

 

小鼠每日体重和评分如下:

0:无疾病迹象;0.5:部分尾部瘫痪;1:尾部瘫痪;1.5:一侧后肢无力;2:双后肢无力;2.5:后肢部分瘫痪;3:后肢瘫痪;3.5:前肢部分瘫痪;4:前肢瘫痪;5:因人道原因死亡或死亡。


PTX需要Pyrin来诱导中性粒细胞在血管内爬行,并最大限度地促进EAE。

 

本期小爱为大家介绍了百日咳毒素作为促进EAE模型的佐剂,在使用过程中的注意事项以及文献常用的造模方法。PTX具有多种生物学活性,能引起百日咳众多的临床症状,同时也是主要的免疫原。与大多数哺乳动物培养细胞结合并特定靶向G蛋白,抑制G蛋白及其在信号通路中的生理功能。正是依赖Gi家族的蛋白偶联受体来抑制信号通路的能力,使得PTX成为细胞生物学研究中的一种重要工具。

 


参考文献


Dumas A , Amiable N , Vaccari J P D R ,et al.The Inflammasome Pyrin Contributes to Pertussis Toxin-Induced IL-1β Synthesis, Neutrophil Intravascular Crawling and Autoimmune Encephalomyelitis[J].PLoS Pathogens, 2014, 10(5):e1004150.

 

免责声明:EAE模型诱导的成功率受多种因素的影响,本文中提供的造模方法来源于已发表的文献,仅供您参考,希望对您成功构建模型有所帮助。

 

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产品名称

产品描述

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百日咳毒素

细菌毒力因子,通常被用作促进EAE的佐剂。

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常与百日咳毒素(PTX)配合使用,诱导实验性EAE模型。

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抗原乳化的免疫佐剂,含灭活细菌,多用于初次免疫。




 

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