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工具篇 | mRNA标准品应用案例展示

更新时间:2024-02-01      点击次数:526

背景介绍:

 

疫情mRNA疫苗的成功开发使得mRNA技术得到重要的关注。mRNA技术作为一种通用性技术,其研发路径和生产工艺显著区别于传统的生物医药研发模式,有望在传染病疫苗、肿瘤疫苗、免疫治疗、蛋白替代疗法、治疗性抗体等多个领域得到广泛应用,是医药研发进入新纪元。

 

在对于核酸药物递送系统研究、蛋白表达的疗效研究以及mRNA药物研发中工具mRNA起到非常重要作用,那么大家知道什么是工具mRNA,它的作用是什么呢?

 

什么是工具mRNA?

 

工具mRNA(mRNA标准品)即成品的标准型信使核糖核酸(类似于大家分子实验中常用的成品质粒)。用户购买后无需对mRNA标准品进行任何处理,可直接应用于相应实验。

 

AG8亚国服务拥有一系列的线性、环状工具mRNA。其中线性mRNA采用化化学合成的Cap1帽结构,使线性mRNA具有高比例的天然帽子结构,修饰碱基 (N1-Methylpseudo-UTP、Pseudo-UTP、5-Methoxy-UTP、5-Methyl-CTP、N6-Methyl-ATP) 有5种可供选择,同时使用优化了适用于哺乳动物细胞的密码子、UTR、polyA结构。环状mRNA通过体外转录生成并环化,继而分离纯化得到成品。

 

工具mRNA分类:

 

1、报告基因类

 

报告基因类mRNA常用于细胞转染、翻译效率、药物递送、体内成像等研究。其中AG8亚国服务EGFP mRNA是一种常用的示踪蛋白mRNA,荧光稳定性强,用于表达加强的绿色荧光蛋白(分离自水母),发射波长为509nm,可通过荧光显微镜或者流式细胞术检测,是观察mRNA递送、翻译的理想工具。

 


货号

产品名称

规格

abs60176

EGFP mRNA

100ug

abs60178

Fluc mRNA

100ug

abs60180

mcherry mRNA

100ug

abs60192

EBFP mRNA

100ug

abs60332

Endless  eGFP mRNA

100ug

abs60333

Endless  Fluc  mRNA

100ug

abs60334

Endless  mcherry mRNA

100ug




图 EGFP mRNA Agarose电泳条带


图 HEK293细胞转染EGFP mRNA 24h后表达效果

 

AG8亚国服务还拥有其他报告基因类工具mRNA如tdTomato mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等荧光蛋白mRNA,可用于对照验证实验,大家如有需要欢迎来询。

 

2、基因编辑类

 

CRISPR/Cas9是*基因编辑系统,被广泛用于治疗各类疾病。Cas9 mRNA可在细胞内瞬时表达Cas9蛋白,能减少免疫反应和脱靶风险。

 

货号

产品名称

规格

abs60174

Cas9 mRNA

100ug

abs60191

Cre mRNA

100ug

abs60335

Endless  Cas 9 mRNA

100ug

 





3、免疫抗原类

 

免疫抗原类mRNA是肿瘤免疫疗法的理想研究工具。卵白蛋白 (OVA) 是丝状蛋白超家族的一员,是在蛋清中发现的主要糖蛋白。是一种常用的免疫和生化研究抗原,是一种已建立的气道高反应性模型过敏原,可激活细胞免疫和体液免疫。

 

货号

产品名称

规格

abs60312

OVA mRNA

100ug

 




4、蛋白替代类

 

EPO mRNA用于表达人源EPO蛋白 (human erythropoietin) 。我们使用 (Abs CapTM) 在体外转录生产了EPO mRNA,化学合成的Cap1结构使其具有高比例的天然的mRNA帽子结构,从而获得高效的表达效果。

 


货号

产品名称

规格

abs60194

EPO mRNA

100ug

abs60336

Endless  EPO mRNA

100ug




 

工具mRNA产品特征:

 


浓度

1mg/mL

状态

溶剂,1mM Sodium Citrate,pH 6.4

储存温度

建议分装,低于-40℃保存,避免反复冻融

效期

建议在2个月内使用完





工具mRNA产品优势:

 

1、Cap1型帽结构,提高mRNA稳定性及翻译效率,更适合哺乳动物;
2、5种修饰可供选择,加入修饰碱基可提高翻译效率,降低免疫原性;
3、合适的PolyA尾结构,保证mRNA稳定性和翻译效率;
4、完整性高,质控严格,方便研究和应用。

 

用户实验案例1:

 

用核酸转染试剂盒(abs60259)转染mCherry mRNA至HEK293细胞24h、48h,在荧光显微镜下观察到的红色荧光稳定且信号强。(具体实验操作可参考核酸转染试剂盒(abs60259)实验操作步骤)


图 转染mCherry mRNA 24h后的荧光


图 转染mCherry mRNA 48h后的荧光

 

用户实验案例2

 

用mRNA转染试剂(abs60339)在不同类型细胞中转染线性工具mRNA—EGFP mRNA,处理细胞24h后利用荧光显微镜拍照,各种细胞都呈现较强的绿色荧光。


图 转染EGFP mRNA于不同类型细胞中

 

用户实验案例3

 

注射线性Luciferase mRNA至活体小鼠体内,小鼠体重150ug,每针注射20uL,共计3针,3天后进行活体成像。


图 Luciferase mRNA注射小鼠后活体成像

 

FAQ:

 

1、工具mRNA保存条件是什么?

A:需要低于-40°C保存,-80℃冰箱或液氮保存都可以,AG8亚国服务所提供的均为新鲜生产的产品,为了达到最佳使用效果,请在收到货物的2个月内使用。若不小心将mRNA短期(例如1天)存放于-20℃,可以在正式实验之前将mRNA跑琼脂糖凝胶电泳看其是否降解。

 

2、工具mRNA是什么状态?

A:我司的工具mRNA是液体状态,通用溶剂一般是1mM柠檬酸钠盐溶液,pH为6.4。

 

3、工具mRNA的货期有多久?

A:我公司工具mRNA均为新鲜生产产品,我们收到订单后会立即安排生产、发货。一般货期为1-2周。

 

4、工具mRNA的纯度能达到多少?

A:线性mRNA可达到90%的纯度;环状mRNA如果长度是3-5k,可达到科研级别纯度,通常能达到85%的纯度。环状mRNA序列越长,关环效率越低,纯化难度越高。

 

5、工具mRNA推荐的帽结构是哪一种?

A:Cap1 AG。加帽率高达95%。

 

6、我所需要的工具mRNA在没有找到,怎么办?

A:目前市面上常规的mRNA标注品类目我公司都是有的。若我司的工具mRNA类别中没有您所需的mRNA,您可以选择我公司的定制合成服务,我们为您设计合成特定的mRNA。

 

其他相关产品推荐


货号

产品名称

规格

abs60259

核酸转染试剂盒

1.5mL

abs60339

mRNA转染试剂

1mL

abs7119

1.5mL离心管(无菌无酶)

10盒/箱

abs7075

200uL吸头(盒装,无菌无酶)

100盒/箱





 


Absin特色产品线:

WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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