预染marker的特性概述
更新时间:2017-07-21 点击次数:1645
预染marker可提高特异性的识别能力。在做westen blot时,用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。zui常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。
预染marker还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白*一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,zui后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
预染marker在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳*分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入*分辨区时停止电泳以得到*分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否*。