Human EGF ELISA Kit

检测原理：

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人EGF抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的EGF与固相抗体和检测抗体结合，形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后，加入显色底物，避光显色。加入终止液终止反应，在450 nm波长(参考校正波长540nm或570nm)测定吸光度值。

检测类型：双抗夹心法

形式：预包被96孔板

检测样本类型：细胞上清液，血清，血浆

上样量：100ul

试剂盒组分：

预包被96孔板、标准品、EGF检测抗体、稀释用缓冲液、显色液（A、B）、洗涤液、终止液、SA-HRP、封板膜和说明书一份。

灵敏度：0.089-0.740pg/mL

检测范围：3.9 - 250 pg/mL

回收率范围：96-103%

保存方法：2-8℃

标准曲线图

背景：

EGF（表皮生长因子，又称Urogastrone）前体是生长因子EGF家族的Group I成员，分子量为185kDa。Group I成员是结合并活化表皮生长因子受体（EGF R）的分子。EGF家族成员被合成为I型跨膜（TM）蛋白，且由蛋白水解生成可溶形式。人表皮生长因子（EGF）是一个长为1185个氨基酸前体分子形式的一个片段，包含1010个氨基酸细胞外区域、21个氨基酸TM区域和153个氨基酸胞质域。这个前体的胞外域（ECD）有三个主要的结构模块。其中包括9个BLDLR重复、1个血管性血友病因子A区域和9个类EGF重复，并在近膜区包含了成熟EGF分子的53个氨基酸的结构（为前体形式的第971位至1023位氨基酸）。这个跨膜185kDa的亚型（氨基酸21-1023），存在于大多数体液中。这个过程同时产生了大量40-100kDa的蛋白片段，可能为蛋白水解降解产物。6kDa成熟EGF亚型的产生过程尚不清楚。它可能源自细胞内部，也可能源于细胞表面，通过细胞表面的膜结合丝氨酸酶水解可溶性的160kDa前体或这个前体水解以后生产的70kDa的分子亚型而来。

值得注意的是，成熟形式的EGF、185kDa跨膜蛋白、已被水解但尚未加工的循环型分子和160kDa前体分子都具有生物学活性。而这些生物学活性主要是因为有EGF肽段嵌入在这些前体分子中。其它类型EGF的修饰都不具备结合EGF受体的活性。编码EGF的基因在表达EGF蛋白过程中存在4种可能的剪切体，但都不影响成熟EGF的序列。其中两种剪切体发生在胞外区序列，分别删除了第913位至953位的氨基酸和第314至355位的氨基酸。另外两种剪切体则涉及EGF的胞内区域，分别以12个氨基酸替换了第1125位至1207位的氨基酸和以17个氨基酸替换了第1136-1207位的氨基酸。成熟的人EGF与小鼠、大鼠和猪的EGF的同源性分别是70%、70%和85%。已知表达EGF 的细胞包括血小板、大脑神经元、星状胶质细胞和小脑浦肯野细胞、布鲁纳细胞（十二指肠）和颌下腺细胞、不着色的纤毛上皮和垂体前叶细胞。EGF有许多不同的生理作用。目前广泛认可的EGF功能主要基于EGF受体-配体的结合而实现。而EGF受体也能和其它EGF家族的蛋白结合，进而形成异源多聚体并与其它EGF受体家族成员二聚化，或者和其它跨膜蛋白如PDGF R和HGF受体产生关联。在任何一种情况下，EGF都可以对胎儿和成人组织产生作用。在胎儿，EGF影响双阴性-双阳性阶段的胸腺细胞生长和分化。在神经元形成过程中，EGF似乎也可以刺激神经胶质神经元的生成并促进其上皮化。后，它能抑制脂肪细胞的成熟，从而增加前脂肪细胞数量。在成人，EGF可以在乳腺的乳生成过程中发挥作用，也可使纤维细胞有丝分裂，ECM离解和迁移，广泛地影响生长因子相关的各种作用。

EGF受体即表皮生长因子受体（也称为HER1和ErbB1），其激活机制尚不明确。目前的研究认为每一个EGF分子和一个EGF受体分子有两个结合位点，这会迫使受体产生构象变化，而和第二个EGF-EGF R复合物结合。这种二聚体即具有实际功能的EGF受体。ErbB2也可以和EGF受体形成异源二聚体，但不能和EGF结合。这可能是因为ErbB2 天然以二聚体的形式存在，掩盖了其配体结合的位点，而使配体无法与其结合。因此，它需要结合一个已经激活的EGF-EGF R复合体才能形成一个功能性的EGF受体。而由于内在的静电斥力作用，ErbB2自身无法形成同源二聚体。EGF也只有在高浓度的环境下也能和ErbB3：ErbB2形成异源多聚体。这个过程的重要性，目前仍是未知的。EGF R的选择性剪切亚型存在于肿瘤细胞中，并可能参与肿瘤发生或使细胞对EGF 受体抑制剂敏感。