细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒

细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒实验流程：
1、试剂准备
1.1准备溶液
1.1.1室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后除结构蛋白提取液外，其他试剂立即置于冰上；
1.1.2 结构蛋白提取液溶解后，可放置于37℃水浴中温浴至透明后，常温放置。
1.2蛋白提取工作液的准备
1.2.1胞浆蛋白提取工作液的准备：临用前，根据处理样品的量估算实验时胞浆蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.2胞核蛋白提取工作液的准备：临用前，根据处理样品的量估算实验时胞核蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.3膜蛋白提取工作液的准备：临用前，根据处理样品的量估算实验时膜蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。
1.2.4 结构蛋白提取工作液的制备：临用前，根据处理样品的量估算实验时结构蛋白提取液的需要量，并分别按照1:50比例加入磷酸酶抑制剂II和1:100比例加入蛋白酶抑制剂PMSF。

2、对于培养细胞样品：
2.1胞浆蛋白提取
2.1.1加2.0ml（2.0×107细胞 ）的胞浆蛋白提取工作液，在4℃条件下震荡20分钟；
2.1.2准备1-5ml的注射器，用注射器吹打步骤1震荡过的溶液50-90次，在4℃条件下，15000g离心10分钟。取上清液存于EP管中，即为胞浆蛋白；
2.2胞核蛋白的提取取
2.1.2步骤获得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞浆蛋白提取工作液，在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下15000g离心10分钟，弃去上清液，沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下15000g离心10分钟，上清液为细胞核蛋白，转入EP管并保存；
2.3胞膜蛋白的提取在步骤2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰冻的膜蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下15000g离心10分钟，上清液为细胞膜蛋白，转入EP管并保存。
2.4结构蛋白的提取在步骤2.3的沉淀物中加入常温或37℃水浴过的透明的结构蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells, 4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下15000g离心10分钟，保存上清液即为细胞骨架蛋白；
2.5待测蛋白的保存待检测浓度的蛋白存于-70℃。

3.对于组织样品：
3.1胞浆蛋白提取
3.1.1加2.0ml/g的胞浆蛋白提取工作液,在4℃条件下研磨，重复匀浆两次，至全部溶解；
3.1.2在4℃条件下，震荡5分钟，18000g离心10分钟。取上清液存于EP管中，即为胞浆蛋白，沉淀物继续实验；
3.2胞核蛋白的提取在步骤3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞浆蛋白提取工作液,在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下18000g离心10分钟，弃去上清液；沉淀物中加1.0ml/g冰冻的胞核蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下18000g离心10分钟，上清液为细胞核蛋白，转入EP管并保存；
3.3胞膜蛋白的提取在步骤3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰冻的膜蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下18000g离心10分钟，上清液为细胞膜蛋白，转入EP管并保存；
3.4结构蛋白的提取
3.4.1在步骤3.3中的沉淀物中加入常温或37℃水浴过的透明的结构蛋白提取工作液0.5ml/g，震荡5分钟，4℃条件下18000g离心10分钟，保存上清液；
3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰冻的胞浆蛋白提取工作液, 在4℃条件下震荡5分钟，4℃条件下18000g离心10分钟,保存上清液；
3.4.3混合前两步的上清液，此为骨架蛋白；
3.5待测蛋白的保存：待检测浓度的蛋白存于-70℃。

-20℃保存，一年有效。

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。建议可适当分装后使用；
2、所有接触样品的用具及试剂均需预冷。裂解蛋白的所有步骤都需在冰浴或4℃进行；
3、试剂盒50T是按照6孔板的单孔细胞量计算，实际使用中本套试剂足够处理5g组织，或者1.25×108细胞，最少细胞不宜少于0.1g组织或者2.5×106。
4、结构蛋白提取液含有SDS,使用中如有沉淀水浴加热溶解即可。
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。