免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液

本免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（Lysis Buffer for WB/IP Assays）是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液，主要成分为 20mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸钠，β-甘油磷酸，正钒酸钠，EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品，适用于 PAGE，蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀，ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。

免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液产品组分

1、试剂准备：

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内将磷酸酶抑制剂按照1:50 加入裂解液中，加入100mM 的PMSF并使PMSF 的最终浓度为1mM。

2、细胞／组织的裂解：

对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗—遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250µL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分；

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入150-250µL 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。

对于组织样品：剪成碎片后，按照每 20mg 组织加入 150-250µL 裂解液的比例加入裂解液，并使用用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。

3、蛋白样品收集：

充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 lP 等操作。