免疫印迹及免疫沉淀用裂解液

产品描述：

Western及IP细胞裂解液，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时，用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。Western及IP细胞裂解液的主要成分为Tris-HCl，NaCl，去垢剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

使用本裂解液获得的蛋白样品，如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测，需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响，则可以使用本裂解液。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质，不能用Bradford法测蛋白浓度。 

使用方法：

1、对于培养细胞样品
（1）取适当量的裂解液，根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
（2）对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后，细胞就会被裂解。
（3）对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5~10×105 细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
（4）充分裂解后，10000~14000g离心3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
注：裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加100uL 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。
2、对于组织样品
（1）取适当量的裂解液，根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
（2）把组织切成细小的碎片。
（3）按照每 20mg 组织加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。
（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
（4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
（5）充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：

1、若频繁使用本品，可以短期4℃保存。若不是频繁使用本品，建议第一次使用本品的时候将裂解液分装冻存，避免反复冻融。
2、若需添加蛋白酶或磷酸酶抑制剂，可使用我司的广谱蛋白酶抑制剂混合物（abs9161），广谱磷酸酶抑制剂混合物（abs9162），以及PMSF，或者自行准备。
3、裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。