SP悬浮细胞质粒DNA转染试剂盒

产品简介: 

该产品是我们研发团队在贴壁细胞质粒DNA转染试剂的基础上进一步优化研发成功的专门用于悬浮细胞质粒DNA转染的试剂。它具有非常好的转染性能，可高效转染多种悬浮细胞，转染效率在悬浮细胞中可高达85%以上（巨噬细胞、EGFP质粒）。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，它采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率不到10%。其使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。

产品特点：

1、较好的细胞转染性能：可高效转染多种悬浮细胞，转染效率可高达85%以上；

2、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响，实验结果更为客观；

3、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

应用：

适用细胞系：293F，THP-1、RAW264.7、BMDM、CHO-S、Jurkat， K562、U937，NB4、MSCs等。

操作步骤 （以24 孔板转染为例）:

A、 细胞接种:

1、 转染前一天或者两天接种细胞，接种细胞量为2-4×105 个。

2、 确保转染时细胞比活度为90%以上，且生长状态良好。

3、 如果细胞在转染前一天铺板，转染时可以不用换液，如果细胞在转染前两天铺板，转染时最好换液。

B、 SP/DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):

1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul Trans buffer，再加入适量的DNA，见附表。用移液器轻轻混匀成DNA稀释液。

2、使用前用移液器吹打混匀转染试剂，立即往DNA稀释液中加入适量的转染试剂，用移液器轻轻混匀。

3、 将SP/DNA复合物室温静置15分钟后，立即转染。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C、转染:

1、将拟转染细胞强烈振荡20-40秒，确保培养细胞分散成单细胞悬液，无细胞结团；

2、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

3、 培养24-96小时后收获。

4、 SP在培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。因收获蛋白需要，可以使用悬浮细胞培养专用的无血清培养基。

附表：不同培养体系推荐初始转染条件

保存方法：

2-8℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年，使用前请先将本品轻轻混匀。

注意事项：

、1、对于24孔板，转染前接种细胞量以（2-4）x105细胞为宜，转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。

2、刚开始转染，建议进行优化实验，如24孔板，可将细胞接种3个孔，每孔接种细胞数分别为2x105 、 3x105 、4x105，次日质粒转染，转染24小时后观察转染效果，选择转染阳性率较高的细胞接种数进行后续实验。
3、应避免转染复合物制备体系中存在血清，因血清会干扰 SP 与DNA形成复合物，转染所用培养基中尽量不要使用抗生素。
4、为了提高转染效率，转染后培养板可放于微型振荡器上培养或每隔1小时人工振荡1次（非常重要）。
5、悬浮细胞转染难度大，且受细胞种类、细胞密度、细胞生长情况、培养方法、操作手法等因素的影响，研究者在转染之前，应查阅相关文献，认真准备转染方案。
6、本试剂主要用于质粒DNA转染，如需质粒DNA、RNA、siRNA均可转染的试剂，请选择SP悬浮细胞核酸转染试剂（abs60325）。