血浆血清外泌体提取试剂盒

描述：

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血清/血浆中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，本血浆血清外泌体提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于血清/血浆中的外泌体提取，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。

产品组分：

使用方法：

自备材料：
高速离心机（可达到 12000 rpm 转速），涡旋振荡器；1.5 mL 离心管，PBS 缓冲液、制冰机。

一、样品预处理：
1、离心机在使用前先于 4℃预冷 10 min；
2、取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 2-8℃条件下进行解冻；如果是新鲜样品，收集样品后置于 2-8℃保存；
3、将样品按照 500 μL /管进行分装，不足部分用 1×PBS 补足至 500 μL。

二、去除杂蛋白：
1、Solution A 从试剂盒中取出后，放置到冰箱冷冻层中至少 1 小时以上，取出预冷的Solution A 置于碎冰上；
2、加 Solution A：在 500 μL 血液样品中加入 400 μL 预冷的 Solution A，立即将离心管盖紧，通过涡旋振荡器充分混匀 30 s；
3、离心去蛋白：将混匀后的样品于 4℃以12000 rpm 离心 20 min，去除样品中的杂蛋白；
4、上清液转移：去除杂蛋白的离心上清液转移至新的 1.5mL 离心管中。

三、提取外泌体：
1、加 Solution B：在去除杂蛋白的离心上清液中加入 120 μL 的 Solution B；
2、溶液混合：加入 Solution B 试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器充分混匀 2 min；再放置于室温下静置 5 min；
3、沉淀外泌体：将装有混合液的离心管于 4℃以 12000 rpm 离心 15 min，弃上清；
4、再次离心：将含有沉淀的离心管再次于 4℃以 12000 rpm 离心 2 min，弃上清（注：尽可能吸净上清液），并将 1.5 mL 离心管于室温下敞口静置 10 min；
5、外泌体重悬：取 200 μL 的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中；
6、收获外泌体颗粒：将含有重悬液的 1.5 mL离心管于 4℃以 12000 rpm 离心 5 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒。
（注：此时可能有较多沉淀，为正常现象）

四、纯化外泌体：
1、外泌体纯化：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 5600 rpm 离心 20 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；（注：EPF 柱不可重复使用）
2、外泌体的保存：纯化后的外泌体以50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。

储存/保存方法：

收到产品后将试剂分开储存，使用前请充分混匀。