细胞上清外泌体提取试剂盒

描述：

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。本外泌体快速提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于细胞培养上清液中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

产品组分

使用方法：

自备材料：
1、高速离心机（可达到 10000 g 离心力），涡旋振荡器； 2mL 离心转子；1.5 mL 离心管；
2、1×PBS 缓冲液（无菌）； 

一、样品预处理：
 1、取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 25℃水浴中进行解冻，将wan全融化后的样品置于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；
 2、样品初始用量：（单次提取时的样品量）  

3、离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于 4℃以 3000 g 离心 10 min，去除样品中的细胞碎片；（注：若沉淀较多，可 3000g/10min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）
 4、上清液转移：去除细胞碎片的离心上清液转移到新的 50mL 离心管中； 

二、提取外泌体：
 1、上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入 Exosome Concentration Solution（ECS 试剂），具体的加入剂量如下：（其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算）  

2、溶液混合：加入 ECS 试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1min，再放置于4℃静置至少2h；（增加静置时间可提高外泌体得率，但静置时间不可超过 24h）
3、沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于 4℃以 10000g离心 60min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒；（注：尽可能吸净上清液）
4、外泌体重悬：取 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物（具体加入剂量如下表），待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中； 

注：其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算
5、收获外泌体颗粒：将含有重悬液的 1.5 mL 离心管于 4℃以 12000 g 离心 2 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒。
（注：若沉淀较多，可 12000 g /2min 离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液） 

三、纯化外泌体：
1、纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3000 g 离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；（注：EPF 柱不可重复使用）
 2、外泌体的保存： 纯化后的外泌 体以50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。