免疫（共）沉淀（IP/CoIP）试剂盒常见问题汇总

Q：步骤上的可选步骤能否省略？

A：该试剂盒是经过实验验证的，再进行验证实验的时候实验室都是要做这个可选步骤的，建议不要省略，按照说明书操作。

Q：protein A和protein G beads怎么选？

A：各5ul就可以了

Q：超声破碎冰上操作是必须的吗？4℃条件能否微调？

A：建议冰上操作，4℃是可以微调的。

Q：beads出现吸不出来的情况，怎么处理？

A：吸之前需注意枪头要剪一下再吸，如若beads吸不上来，可加入等体积的20%乙醇混匀后再吸。

Q：如果没有超声破碎仪的话，能不能用酶解的办法破碎细胞？

A：酶解和超声都是可以的，酶的浓度按照正常实验室使用浓度就可以。

Q：实验的时候能抗体beads一起加吗？还是先加抗体再加beads？

A：都可以，建议参考说明书使用，先加抗体再加beads。

Q：washing buffer一定要使用配套的吗？

A：zui终浓度是稀释的1*的washing buffer都可以。

Q：怎么看出现的条带结果？

A：比较关注的就是三个泳道，input和IgG以及检测互相作用的泳道，理论上input有一条目的条带，IgG没有条带。如果input没有条带，说明在进行免疫共沉淀之前没有进行WB验证，建议先验证之后再从头做。IgG阴性对照出现条带的话是不正常的，应该是受重链和轻链的影响，说明使用的二抗不正确，建议更换特异性更强的二抗。

Q：免疫共沉淀试剂盒裂解液能用于组织吗？比例又是如何？

A：可以的，不过要事先将组织研磨成匀浆，比例和细胞比例一致。

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