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免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒常见问题汇总

更新时间:2018-02-24      点击次数:7472

Q:步骤上的可选步骤能否省略?

A:该试剂盒是经过实验验证的,再进行验证实验的时候实验室都是要做这个可选步骤的,建议不要省略,按照说明书操作。

 

Q:protein A和protein G beads怎么选?

A:各5ul就可以了

 

Q:超声破碎冰上操作是必须的吗?4℃条件能否微调?

A:建议冰上操作,4℃是可以微调的。

 

Q:beads出现吸不出来的情况,怎么处理?

A:吸之前需注意枪头要剪一下再吸,如若beads吸不上来,可加入等体积的20%乙醇混匀后再吸。

 

Q:如果没有超声破碎仪的话,能不能用酶解的办法破碎细胞?

A:酶解和超声都是可以的,酶的浓度按照正常实验室使用浓度就可以。

 

Q:实验的时候能抗体beads一起加吗?还是先加抗体再加beads?

A:都可以,建议参考说明书使用,先加抗体再加beads。

 

Q:washing buffer一定要使用配套的吗?

A:zui终浓度是稀释的1*的washing buffer都可以。

 

Q:怎么看出现的条带结果?

A:比较关注的就是三个泳道,input和IgG以及检测互相作用的泳道,理论上input有一条目的条带,IgG没有条带。如果input没有条带,说明在进行免疫共沉淀之前没有进行WB验证,建议先验证之后再从头做。IgG阴性对照出现条带的话是不正常的,应该是受重链和轻链的影响,说明使用的二抗不正确,建议更换特异性更强的二抗。

 

Q:免疫共沉淀试剂盒裂解液能用于组织吗?比例又是如何?

A:可以的,不过要事先将组织研磨成匀浆,比例和细胞比例一致。

 

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