可以竞争性结合ATP结合位点,达到抑制p38MAPK的目的,作为p38MAPK特异性抑制剂被广泛应用于实验研究。本研究通过p38MAPK抑制剂SB203580处理DC,检测DC表面成熟分子表达、细胞因子分泌、抗原提呈能力、及其介导的CD4+-鸡卵清蛋白转基因小鼠(CD4+-ovalbumin transgenic mice)T细胞即OT-Ⅱ细胞特异性增殖的变化,阐述SB203580对小鼠脾脏DC功能的影响。
不同药物干预组(rHu-EPO干预组、SB203580组、rHu-EPO+SB203580组)于术前半小时开始给予相关药物皮下注射,以后每周给药2次,共计给药4周.各组术后连续3 d肌肉注射青霉素40万U.1.3.3血流动力学测定分别于术后24 h、2周、4周进行大鼠血流动力学测定.按前述方法麻醉动物,分离右侧颈内动脉,行右侧颈动脉插管,采用多导生理记录仪记录心率(HR)、颈动脉收缩压(SAP)、颈动脉舒张压(DAP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压大上升和下降速率(±dp/dtmax)
SB203580低剂量组(5μmol/L)、SB203580中剂量组,加入不同浓度的SB203580,培养24 h后,加入NMDA,10 min后进行后续试验。MTT法测细胞生存力细胞接种于96孔培养板内,每组取8孔,细胞培养至第7天时,经NMDA和SB203580处理后的细胞,再培养24 h后,每孔加入20μmol/L MTT液,于37℃孵箱孵育4 h,取出,弃去培养液,每孔加入200μL DMSO,微量混匀器充分混匀,酶标仪570 nm处读取吸光度值。吖啶橙(acridine orange,AO)荧光染色法AO与细胞内的DNA、RNA都有亲和力,但结合后却发出不同颜色荧光,DNA呈亮绿色,而RNA呈橘红色或火红色。细胞加样品培养24 h后终止培养,取出盖玻片,0.01 mol/L PBS振洗5 min,置于分析纯甲醇中刘学文,等.p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3在NMDA诱导的体外培养神经元中的激活及SB203580的保护作用53固定10 min后取出,挥干甲醇。取1 g吖啶橙溶于100 mL生理盐水中,配成1%的母液4℃保存备用,使用时用0.1 mol/L PBS(pH 4.8)稀释成0.01%工作液。