DNA纯化——PCR产物纯化

一、产物直接纯化

PCR扩增完成后需要进行琼脂糖凝胶电泳检测，在条带单一无其他杂带的情况下，可以直接对产物进行纯化，常见的纯化方法有：

1、硅胶层析柱法

原理：大多数离心柱中吸附DNA的是一层硅胶膜，实际上就是一层玻璃纤维，其表面有大量修饰的硅羟基（Si-OH），硅羟基在溶液中解离后带负电，然后与带正电盐离子、带负电DNA形成电桥，从而吸附住DNA，使得DNA双链变单链，不会被生物大分子溶剂洗脱，但能经水溶性缓冲液水化后，被定量回收，从而实现纯化分离。

图1 硅胶层析原理示意图

 图2 硅胶层析流程简图

2、磁珠法（abs60151）

原理：磁珠是有磁性的能吸附DNA的物质，其内部核心是铁离子，在磁场作用下可以吸附在磁体上。在核心外，经过羧化，带有羧基基团，在特定的离子条件下，可以与DNA结合。结合后，在外磁场的作用下，磁珠与DNA结合体移动到磁体周围，可以很方便去除其他多余的液体，这时，不能与磁珠结合的所有杂质都随水溶液一并去除。然后，在洗脱条件下，DNA与磁珠分离，溶解在水中，将溶解有DNA的溶液转移，就得到了纯化后的DNA样本。

图3 磁珠法结构示意图

 图4 磁珠法纯化DNA流程简图

3、其他纯化方法

①渗透液结合醇沉纯化

原理：利用分子大小不同，小分子的物质能够通过渗透膜溶解到大量的溶液中去，而大分子的物质不能通过渗透膜，所以继续留存在透析袋中，通过乙醇沉淀最后达到去除小分子物质，得到纯化的有机大分子的效果。

②直接沉淀纯化

原理：DNA分子在高盐离子醇溶液中会被沉淀出来，而其他物质继续溶液在溶液中，沉淀出来的DNA分子经过离心与溶液成分分开，达到纯化的目的。
 

不同纯化方法对比

二、凝胶回收纯化

如电泳检测结果存在非特异性条带，则需要将目的条带切出来，再用胶回收试剂盒（abs60098）对凝胶进行回收纯化，相较于直接纯化，只是多了一步溶胶的过程，相应的产物纯度提高，回收率则下降。

结语：

在PCR扩增完成后，反应体系中除了DNA段，还存在离子、dNTP、引物及聚合酶等物质，这些物质会影响后续克隆测序等实验，因此对其产物进行纯化是必*步骤，不同的纯化手段各有自己的优缺点，老师们可以根据自己的需求选择适合自己的方法。

 Absin相关产品推荐