mRNA疫苗研究明星爆品——T7 RNA聚合酶

更新时间：2021-12-03 点击次数：1406

T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌体DNA编码的酶，对T7启动子序列具有高度特异性。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

产品特点：
该酶对T7启动子具有高度特异性，不识别其它生物来源的启动子。可以识别修饰的核苷酸，例如生物素标记、荧光素标记、放射性同位素、地高标记dNTP，用于各种标记RNA的合成，进行下游实验。

质量保证：
1.SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，毛细管电泳检测纯度在95%以上；
2.酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染；
3.光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。

纯度验证

RNA酶残留定量检测

T7 RNA聚合酶	RFU值	RFU平均值	CV%	Ratio
DNA酶残留定量检测
T7 A	6730	7112.5	16.914	6.65
	7495
T7 B	6188	6204	0.731	5.8
	6220
T7 absin	5991	6218	10.352	5.81
	6445
RNA酶残留定量检测
T7 A	18726	17918	6.3773	1.1
	17110
T7 B	53599	41543.5	41.039	2.56
	29488
T7 absin	22545	21289.5	8.34	1.31

应用实例
【RNA体外转录合成】
1. 在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系
2. 将上述反应液混合均匀，低速离心至管底，37℃孵育4个小时。若转录本长度小于100 nt,增加反应时间至4-8个小时；
3. 转录后取样品进行凝胶电泳，取样1µL稀释到5 µL,然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测，以确定转录是否成功.
4. 反应完成后，加入DNase 1 (RNase free) , 37 ℃孵育30 min以去除模板DNA.
注：
(I)为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5‘突出末端.
(2)反应体系于室温配置。由于10xTranscription Buflfer中含有亚精胺，低温下亚精胺浓度过高容易引起DNA模板沉淀，建议最后加入模板DNA.
(3)建议在PCR仪中进行反应，为防止蒸发，建议开启热盖功能.
(4)使用试剂、容器等无RNA酶污染。

组分	体积
DNase RNase-Free Water	Up to 20 µL
ATP/CTP/GTP/UTP(100mM each)	2µL each
10x Transcription Bufler	2 µL
DNA template	0.5-2µg
RNase Inhibitor (40 U/µL)	0.5 µL
Inorganic PyTophosphatase(0.1U/µL)	0.5µL
T7RNA Polymerase (1000 U/µL)	0.2 ~ 1 µL
Mg2+ (400 mM)	1 µL
Total Volume	20 µL

产品信息

货号	名称	规格
abs60153	T7 RNA 聚合酶	50KU/200KU/1000KU

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