全国服务咨询热线:

article技术文章
首页 > 技术文章 > mRNA疫苗研究明星爆品——牛痘病毒加帽酶

mRNA疫苗研究明星爆品——牛痘病毒加帽酶

更新时间:2021-12-10      点击次数:1290
真核生物中mRNA经转录后修饰在5′端形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对 mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1和D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤 甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法,能显著提高体外转录的RNA的稳定性和翻译能力。的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

产品特点:
本产品在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,效率可达到100%,并且保证加帽方向正确。

质量保证:

1、SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,毛细管电泳检测纯度在95%以上;
2、酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染;
3、光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。

产品用途:

1、可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应;
2、可应用于mRNA的5’末端标记反应。

纯度验证


RNA酶残留定量检测


RFU值RFU平均值CV%Ratio
VCE A28469 2858028524.50.27521.76
VCE B79995 78605793001.23944.88
VCE absin17845 1790617875.50.24131.1

应用实例
【加帽反应】

适用于10µgRNA (>I00nt)的加用反应,反应体系20µL,且可根据实际需要放大。
1.取10µgRNA,用 RNase free water将适量 RNA稀释 至15µL;
2.将RNA置于65℃加热5min,结束后冰上放置5 min;
3.按照表格依次加入各组分;
4.37℃反应30 min.
5.RNA加帽完成,可进行后续实验. 

组分体积
Denatured RNA15µL
10x Capping Reaction Buffer2µL
GTP(l0 mM)1µL
SAM (2 mM)1µL
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/µL)1µL
Total volume20µL

应用实例
【5′末端标记反应】

本步骤适用于5′末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大。其标记效率受反应体系中RNA与 GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1.用RNase Free Water将适量RNA稀释至 14µL;
2.将RNA置于65℃加热5 min,结束后冰上放置5 min;
3.按照表格依次加入各组分:
4.37℃孵育30 min;
5.RNA5′端标记完成,可进行后续实验。
*注:GTPMix为GTP和少量标记物,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。 

组分体积
Denatured RNA14 µL
IOx Capping Reaction Buffer2µL
GTP Mix2µL
SAM (2 mM)1µL
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/µL)1µL
Total volume20µL


产品信息

货号名称规格
abs60152牛痘病毒加帽酶500U/2000U/10000U


更多相关产品推荐:

货号名称规格
abs60157全能核酸酶10 KU/25KU
abs44075719T4 DNA连接酶20KU/100KU/500KU
abs60153T7 RNA 聚合酶50KU/200KU/1000KU
abs60155Pseudo-UTP10ul/50ul/1ml
abs60156N1-Methyl-Pseudo-UTP10ul/50ul/1ml

 

Absin特色产品线(全部现货):
WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

 


AG8亚国服务(上海)生物科技有限公司
地址:上海市浦东新区新浩路58号申江科创园18栋
邮箱:wulan@absin.cn
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息