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mRNA结构的保护伞——5’Cap

更新时间:2022-05-06      点击次数:2293

mRNA的5’端的帽子结构可以提高其结构稳定性、增强翻译效率以及降低mRNA在细胞中的免疫原性1。作为mRNA的重要组成部分,帽子结构可以称得上是mRNA结构的保护伞。那么,接下来我们就来学习一下帽子结构。

  • 帽子结构简介

帽子结构的化学本质是mRNA转录过程中发生修饰所形成的位于mRNA 5'端的一个特殊结构,即m7GPPPN结构,又称甲基鸟苷帽子。它是在RNA三磷酸酶,鸟苷酰转移酶,mRNA(鸟嘌呤-N7)甲基转移酶和mRNA(核苷-2’)甲基转移酶共同催化作用下形成的。甲基化程度的不同可形成3种帽子:CAP 0型、CAP 1型和CAP 2型(如图1)。

 
图1.不同位置甲基化形成的帽结构2


帽子结构是mRNA翻译起始的必要结构,为核糖体识别mRNA提供了信号,协助核糖体与mRNA结合,使翻译从AUG开始。同时帽子结构可增加mRNA的稳定性,保护mRNA免遭5’→3’核酸外切酶的攻击。除去天然帽结构,体外转录过程中也多用帽结构类似物提高mRNA结构稳定性,常见的有ARCA和Cap 1结构类似物等。

  • 加帽方式及对比

酶法加帽:使用加帽酶进行转录后加帽,最常使用的是牛痘病毒加帽酶(VCE),该反应过程中加帽酶的异源二聚体会导致产量较低,短期内难以放大。特点:先转录后加帽,由于增加质控项目工序繁杂(如图2),加帽率*,但各类酶成本较高。

共转录加帽:使用帽类似物进行共转录加帽,目前常用的帽类似物有两种ARCA(抗-反帽结构类似物)和Cap1帽类似物。有研究表明Cap 1结构能够增强mRNA的翻译效率,从而提高mRNA在转染和显微注射实验中的表达。且随着帽子结构的不断优化,加帽率大幅提升,成本逐渐降低,共转录加帽法越来越受各类学者青睐。特点:一步法加帽,操作简单(如图2),使用Cap 1结构帽类似物,加帽率可达95%,随着帽结构优化研究的深入,成本逐渐降低3

 
图2. 两种加帽方式对比

  • 三代帽子类似物及其对比


第二代帽结构传统帽类似物ARCA:Cap 0结构非天然加帽,存在较强免疫原性,加帽率80%左右,转录产量低约1.5mg/ml,成本高。

第三代帽结构Cap1帽类似物:  Cap 1结构模仿天然加帽,免疫原性降低,加帽率95%左右,转录产量低约4mg/ml,成本约为ARCA帽类似物的三分之一。

  • AG8亚国服务提供几种类型CAP(AG/AU/GG)

 Cap1帽类似物  类型  货号  特点
Cap AG abs60182 模仿天然加帽、 降低免疫原性、 加帽率97-99.5%
Cap AU abs60184
Cap GG abs60183

 

  • 帽结构5月上新

除以上帽结构,5月初我们即将重磅推出新修饰Cap 1帽结构以及Cap 2帽结构类似物的相关产品,敬请期待。

 

 

【参考文献】:

  • Fabian M, Nils M, Andrea R. Synthetic mRNA capping[J]. Beilstein Journal of Organic Chemistry, 2017, 13:2819-2832.

  • Chen, Yu & Guo, Deyin. (2016). Molecular mechanisms of coronavirus RNA capping and methylation. Virologica Sinica. 31. 10.1007/s12250-016-3726-4.

  • Henderson JM, Ujita A, Hill E, Yousif-Rosales S, Smith C, Ko N, McReynolds T, Cabral CR, Escamilla-Powers JR, Houston ME. Cap 1 Messenger RNA Synthesis with Co-transcriptional Clean Cap® Analog by In Vitro Transcription. Curr Protoc. 2021 Feb;1(2):e39. doi: 10.1002/cpz1.39. Erratum in: Curr Protoc. 2021 Dec;1(12):e336. PMID: 33524237.

 

 

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