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RAW 264.7细胞培养攻略

更新时间:2023-01-10      点击次数:795
RAW 264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;在正常培养中,细胞会出现多边形和不规则形状,并伴有许多伪足的生成,细胞贴壁能力很强。 RAW 264.7细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。呈不规则形,贴壁;细胞生长速度快,2-3天即可传一代;营养体系是DMEM+10%FBS。
 
表1 RAW 264.7细胞基本信息

名称

RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

形态

不规则形

生长特性

贴壁;细胞生长速度快,2-3天即可传一代

营养体系

DMEM(abs9483)+10%FBS(abs972)+1%PS(abs9244)


图1 RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

首先我们讨论的第一大问题是胰酶消化对RAW 264.7细胞的刺激分化。如图2所示:被胰酶消化过的RAW 264.7细胞表现出明显的分化现象呈多角形,有较长触角。


图2 分化的RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

如何避免细胞传代因胰酶而受刺激分化,刮取是比较合适的方法。把细胞培养液倒掉,加入37℃遇温的PBS,然后刮细胞,食指和拇指夹紧细胞刮,细胞刮橡胶头刮面切面与平皿平行,用腕力轻轻刮(注意用腕力刮,不要用臂力),切记只能刮一次,不要来回刮和反复刮,吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打。

接下来我们讨论的第二种情况是为啥RAW 264.7换了血清批次后聚团严重?如图3所示:换血清批次后严重聚团的RAW 264.7细胞,呈片状分部,片层之间间隔明显。


图3 更换血清批次后严重聚团的RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

如果您刚好也碰到这种情况,那不妨来了解一下血清批间差:血清来源于动物,其组成成分有1000种左右,且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的,所以批间差异是存在的。RAW 264.7细胞本身有聚团生长特性,但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。

怎样预防血清批间差导致的细胞聚团呢?先用血清试用装,试用效果好,可购买和血清试用装批次相同的正装,囤积半年或一年的用量,有效避免批间差对细胞的影响(胎牛血清在-20℃保存可达5年)。

最后咱们讨论的第三大问题是有分化的细胞说明细胞状态不好吗?如图4所示,细胞群中有个别细胞出现触角。


图4 个别分化的RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

值得一提的是培养时,无法保证100% 不分化,通过传代可以将分化比例控制在一定范围。RAW264.7细胞生长速度快,2-3天即可传一代, 传代时间间隔超过3天更容易分化,很难吹下,每一次接种密度都要控制好。推荐传代比例为1:3—1:6;推荐传代时间:2—3天;推荐传代融合率:80%-90%
看了这么多长触角的细胞,我们来看看“马相"还不错的RAW 264.7细胞吧。如图5和图6所示,生长良好的RAW 即使融合度达到很高仍不分化,胞体边界感清晰,各个喂得圆鼓鼓、胖嘟嘟的,时刻准备着为人类生命科学研究而“献身"。

图5和图6 长势良好的RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)

本期讲解就到这里了,下一期您想了解哪种细胞的培养攻略呢?欢迎留言评论哦。如有细胞培养问题,欢迎扫码加我微信哦。
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本期小爱推荐

✦培养简单     ✦扩增效率高     ✦维持稳定传代

货号

品名

规格

abs977

胎牛血清(特级)

500ml

abs972

胎牛血清(优级)

500ml

abs974

胎牛血清(标准级)

500ml

abs9483

高糖DMEM培养基

500ml

abs9484

RPMI-1640培养基

500ml

abs9505

MEM培养基

500ml

abs9506

α-MEM培养基

500ml

abs9554

Ham's F-12

500ml

abs9561

DMEM/F-12培养基

500ml

abs961

10×PBS缓冲液

500ml/500ml×10

abs962

PBS缓冲液

500ml

abs970

D-PBS缓冲液(1×,无钙镁)

500ml

abs971

D-PBS缓冲液(含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs9257

Hanks平衡盐溶液(不含Ca2+ Mg2+,无酚红)

500ml

abs9258

Hanks平衡盐溶液(含Ca2+ Mg2+,无酚红)

500ml

abs47014938

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚红

100ml

abs47047375

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),不含酚红

100mL

abs9479

无DMSO无血清细胞冻存液

100mL

abs9417

无血清细胞冻存液

100mL

abs9473

细胞冻存液(含血清)

100mL

 

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