在样本制备的过程中,往往会应用一些试剂(如多聚甲醛、福尔马林等)对新鲜组织进行处理,这个过程可能导致抗原位点被封闭,为了避免影响后续免疫染色的效果,我们需要先对切片进行抗原修复。对于石蜡切片来说,抗原修复是必须的步骤,常用的方法有酶消化法和热修复法。
1、酶消化法
作为最早的抗原修复方法,常用的消化酶有三:胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用极易受温度影响,如果消化不足,则无法充分暴露出抗原位点,过度的消化又会破坏组织结构,影响最后阳性信号的判读,因此在后续的发展中,酶消化法渐渐被热修复技术所替代,但对于个别抗原,如免疫球蛋白、补体,以及在甲醛固定、石蜡包埋的肾活检中,酶消化法依旧不可替代。
2、热修复法
抗原热修复是采用高温、高压方法配合合适的抗原修复液,使得被固定液封闭的抗原位点重新暴露,提高抗体的阳性检出率。
常用的抗原修复液有两种:柠檬酸钠缓冲液(pH=6)、EDTA缓冲液(pH=8或9),一般来说一抗的说明书都会写明需要选择哪种修复液。如果说明书没有推荐,柠檬酸钠缓冲液能够适配大部分的抗体,EDTA缓冲液相对修复效果更强,但阳性增强的同时也会提高非特异背景,一些比较难表达的抗体可以选择EDTA缓冲液。
热修复方法 | 微波热修复 | 水浴热修复 | 高压热修复 |
操作 | 在染色盒中加入抗原修复液,放入切片,置于微波炉中高火煮沸,低火维持15min后取出染色盒,冷却至室温 | 在染色盒中加入抗原修复液,放入切片,置于水溶锅中加热,其间不断用温度计测其温度,待抗原修复液的温度达到有效温度(92℃↑),维持40min后取出染色盒,冷却至室温 | 在染色盒中加入抗原修复液,放入切片,置于高压锅内加热至饱压后继续加热5min,关闭电源,10min后取出染色盒,冷却至室温 |
优点 | 加热的时间和温度都可以有所调整 | 温和,均匀,不易脱片,对组织形态结构影响少 | 受热均匀,暴露抗原位点效果好,受环境条件影响小,可重复性高 |
缺点 | 时间长,修复液容易蒸干,需要及时观察补充;受热容易不均匀,沸腾易导致脱片;不同微波炉功率有差异,难以标准化 | 需要较长时间;染色盒材料不同,热传导性不同,会影响加热效果,容易出现抗原表达弱、阳性率低的结果 | 易导致脱片;使用高压锅要小心蒸汽烫伤,使用要规范谨防锅内蒸汽过饱和引发事故 |
小爱温馨提示,没有哪一种抗原修复液或者修复方法能够适配所有的抗体和样本,最佳条件还是需要在摸索实践中确定哦!
任选5件,即享八折!!!
分类 | 货号 | 品名 | 规格 | 货期 |
固定 | abs9179 | 4%多聚甲醛/通用型组织固定液 | 500ml | 现货 |
抗原修复 | abs9249 | 柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×) | 100ml | 现货 |
abs9207 | 冰冻切片快速抗原修复液(5×) | 100ml | 现货 | |
abs9208 | 细胞爬片抗原修复液(1X) | 100ml | 现货 | |
abs9247 | EDTA抗原修复液(50×) | 100ml | 现货 | |
abs9342 | Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0) | 100ml | 现货 | |
abs9248 | 柠檬酸钠抗原修复液(50×) | 100ml | 现货 | |
abs9336 | 胃蛋白酶抗原修复液 | 100ml | 现货 | |
细胞通透(胞内指标) | abs9149 | Triton X-100/曲拉通X-100 | 100ml/500ml | 现货 |
淬灭 | abs9333 | 过氧化物酶封闭液(H2O2法) | 100ml | 现货 |
abs9152 | 吐温-20 | 500ml/2.5L | 现货 | |
封闭 | abs933 | Goat serum | 10ml/50ml | 现货 |
abs935 | 驴血清 | 50ml | 现货 | |
abs9157 | 牛血清白蛋白 (BSA) | 100g | 现货 | |
一抗 | 多指标IHC专用一抗(CD3、CD8、CD4、FOXP3、KI-67......) | 1-2周 | ||
abs9299 | 一抗二抗稀释液 | 100ml/1L | 现货 | |
二抗 | 即用型二抗试剂盒(abs957、abs996、abs997、abs998) | 现货 | ||
HRP二抗 | 现货 | |||
显色液 | abs9210 | DAB 显色试剂盒(棕黄色,IHC) | 1kit | 现货 |
abs9211 | DAB 显色试剂盒(蓝紫色,IHC) | 1kit | 现货 | |
复染(可选) | abs9214 | 改良型Mayer's苏木素染液 | 100ml/500ml | 现货 |
封片(DAB显色) | abs9177 | 中性树胶 | 100ml | 现货 |
缓冲液 | abs962 | 1×PBS缓冲液 | 500ml/500ml*10 | 现货 |
abs952 | 10*TBST | 100ml/1L | 现货 | |
abs9340 | PBST(1×,pH7.4) | 500ml | 现货 | |
组化笔 | abs929 | PAP Pen 组化笔 | 1支 | 现货 |
电话
微信扫一扫