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IHC专题——抗原修复

更新时间:2023-02-06      点击次数:976

在样本制备的过程中,往往会应用一些试剂(如多聚甲醛、福尔马林等)对新鲜组织进行处理,这个过程可能导致抗原位点被封闭,为了避免影响后续免疫染色的效果,我们需要先对切片进行抗原修复。对于石蜡切片来说,抗原修复是必须的步骤,常用的方法有酶消化法和热修复法。

1、酶消化法

作为最早的抗原修复方法,常用的消化酶有三:胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用极易受温度影响,如果消化不足,则无法充分暴露出抗原位点,过度的消化又会破坏组织结构,影响最后阳性信号的判读,因此在后续的发展中,酶消化法渐渐被热修复技术所替代,但对于个别抗原,如免疫球蛋白、补体,以及在甲醛固定、石蜡包埋的肾活检中,酶消化法依旧不可替代。

2、热修复法

抗原热修复是采用高温、高压方法配合合适的抗原修复液,使得被固定液封闭的抗原位点重新暴露,提高抗体的阳性检出率。

常用的抗原修复液有两种:柠檬酸钠缓冲液(pH=6)、EDTA缓冲液(pH=8或9),一般来说一抗的说明书都会写明需要选择哪种修复液。如果说明书没有推荐,柠檬酸钠缓冲液能够适配大部分的抗体,EDTA缓冲液相对修复效果更强,但阳性增强的同时也会提高非特异背景,一些比较难表达的抗体可以选择EDTA缓冲液。




常见热修复方法对比

热修复方法

微波热修复

水浴热修复

高压热修复

操作

在染色盒中加入抗原修复液,放入切片,置于微波炉中高火煮沸,低火维持15min后取出染色盒,冷却至室温

在染色盒中加入抗原修复液,放入切片,置于水溶锅中加热,其间不断用温度计测其温度,待抗原修复液的温度达到有效温度(92℃↑),维持40min后取出染色盒,冷却至室温

在染色盒中加入抗原修复液,放入切片,置于高压锅内加热至饱压后继续加热5min,关闭电源,10min后取出染色盒,冷却至室温

优点

加热的时间和温度都可以有所调整

温和,均匀,不易脱片,对组织形态结构影响少

受热均匀,暴露抗原位点效果好,受环境条件影响小,可重复性高

缺点

时间长,修复液容易蒸干,需要及时观察补充;受热容易不均匀,沸腾易导致脱片;不同微波炉功率有差异,难以标准化

需要较长时间;染色盒材料不同,热传导性不同,会影响加热效果,容易出现抗原表达弱、阳性率低的结果

易导致脱片;使用高压锅要小心蒸汽烫伤,使用要规范谨防锅内蒸汽过饱和引发事故


小爱温馨提示,没有哪一种抗原修复液或者修复方法能够适配所有的抗体和样本,最佳条件还是需要在摸索实践中确定哦!

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分类

货号

品名

规格

货期

固定

abs9179

4%多聚甲醛/通用型组织固定液

500ml

现货

抗原修复

abs9249

柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)

100ml

现货

abs9207

冰冻切片快速抗原修复液(5×)

100ml

现货

abs9208

细胞爬片抗原修复液(1X)

100ml

现货

abs9247

EDTA抗原修复液(50×)

100ml

现货

abs9342

Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0)

100ml

现货

abs9248

柠檬酸钠抗原修复液(50×)

100ml

现货

abs9336

胃蛋白酶抗原修复液

100ml

现货

细胞通透(胞内指标)

abs9149

Triton X-100/曲拉通X-100

100ml/500ml

现货

淬灭

abs9333

过氧化物酶封闭液(H2O2法)

100ml

现货

abs9152

吐温-20

500ml/2.5L

现货

封闭

abs933

Goat serum

10ml/50ml

现货

abs935

驴血清

50ml

现货

abs9157

牛血清白蛋白 (BSA)

100g

现货

一抗

多指标IHC专用一抗(CD3、CD8、CD4、FOXP3、KI-67......)

1-2周

abs9299

一抗二抗稀释液

100ml/1L

现货

二抗

即用型二抗试剂盒(abs957、abs996、abs997、abs998)

现货

HRP二抗

现货

显色液

abs9210

DAB 显色试剂盒(棕黄色,IHC)

1kit

现货

abs9211

DAB 显色试剂盒(蓝紫色,IHC)

1kit

现货

复染(可选)

abs9214

改良型Mayer's苏木素染液

100ml/500ml

现货

封片(DAB显色)

abs9177

中性树胶

100ml

现货

缓冲液

abs962

1×PBS缓冲液

500ml/500ml*10

现货

abs952

10*TBST

100ml/1L

现货

abs9340

PBST(1×,pH7.4)

500ml

现货

组化笔

abs929

PAP Pen 组化笔

1支

现货

 



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