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细胞培养小分子药物配制方法解析

更新时间:2023-03-27      点击次数:1184

科研实验中我们经常需要配制各种浓度的试剂。例如细胞实验一般需要加入小分子激动剂/抑制剂;分子转化实验一般会加入抗生素;免疫实验需要加入免疫刺激物/免疫佐剂等。这些昂贵的试剂浓度一旦计算错误,不仅挑灯夜战得来的数据毁于一旦,早日发文的愿望也随之破灭,可谓一失足成千古恨。今天小爱就为大家解决这一难题,让我们学会快速换算试剂浓度,摆脱科研失误。


案例一

抑制剂储存液配制



我们买来的小分子抑制剂一般是冻干粉,需要把它配制成溶液。首先,我们应该知道药物的分子量、溶解度以及规格。如果是毫克级小包装,一般不需要称量分装,直接在原瓶中溶解配成储存液。

以ROCK抑制剂Y-27632为例,产品信息如下:

CAS号

规格

分子量

 可溶性/溶解性

146986-50-7

5mg

247.34

DMSO:≥ 32mg/mL (129.38mM)


该药物推荐溶剂DMSO,同时,最大只能配成129.38mM的储存液。这一点非常重要。有些人没有注意药物溶解性,直接在非水溶性药物中加入PBS配置,结果药物不溶,“损失惨重"。


假如我们需要配置10mM储存液,计算公式如下:

  质量(mg)= 浓度(mM)x 体积(L)x 分子量  (1)
5(mg)= 10(mM)x ?(L)x 247.34


即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO,即可配制成10mM溶液。(注:此处要预估原瓶的容量,如果原瓶容量小于2 mL,应考虑配置更大浓度的储存液,如20mM,加入1.01 mL DMSO)。

此外,我们也会经常遇到质量浓度和摩尔浓度单位转换,同样以10mM Y-27632为例:

10mM=10mmol/L,化合物分子量为247.34,即247.34g/mol=247.34mg/mmol

10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL

即10mM Y-27632溶液相当于2.4734mg/mL

浓度快速换算法则

1)mM转换mg/mL,摩尔浓度数值乘以分子量再除以1000;


2)mg/mL转换mM,质量浓度数值除以分子量再乘以1000。


案例二

抑制剂储存液稀释


我们买来抑制剂的冻干粉,配制储存液的浓度为10mM,如果需要使用终浓度为25uM进行细胞实验,需要加入多少抑制剂储存液呢?记住下面这个稀释公式就可以了:

起始浓度 x 起始体积 = 最终浓度 x 最终体积

  C1(mM) x V1(mL)= C2(mM)x V2(mL) (2)

首先,

注意单位,我们假设最终体积为2mL,代入公式:

10(mM)x V1(mL)= 0.025(mM)x 2(mL)




即我们需要吸取5uL的储存液进行实验操作。


案例三

百分比浓度换算



我们在使用二硫苏糖醇(DTT)做实验时,会遇到这样的问题:已发表的文献中使用0.1%的DTT溶液,而你购买的DTT为1mol/L的储存液,那么这该如何换算呢?请听小爱为您解答:

DTT的分子量为154,即154g/mol,储存液换算成质量浓度C1为

154g/mol x 1mol/L = 154g/L




假设需配制1L的0.1%DTT溶液,即V2 = 1L = 1000mL

0.1% DTT溶液为0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L,即C2 = 1g/L

再使用公式(2)C1 x V1 = C2 x V2 可得:

154(g/L)x V1(L)= 1(g/L)x 1(L)



V1 = 6.5mL,即吸取6.5mL 1mol/L的DTT储存液,加入993.5mL稀释液中即可获得0.1%的DTT溶液。

如果我们购买的是固体二硫苏糖醇,配制0.1%的DTT溶液方法如下:精确称取1g二硫苏糖醇,用水定容至1000mL即可。


DL-二硫苏糖醇科普

DL-二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)具有很强的还原性,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。DTT有抗氧化作用,它能保护酶分子上的还原性基团,维持还原性环境,稳定酶的活性。DTT中还含有一定RNA酶抑制剂,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巯基乙醇相似的作用,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。用作蛋白质巯基保护剂和蛋白质二硫键的裂解和顺序分析。

DL-二硫苏糖醇应用:

※ 作为牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的还原和烷基化反应物之一;

※ 作为精子去膜和再激活培养基的一个组分;

※ 因硫醇可有效保护生物催化剂的活性位点而维持酶的稳定性;

※ 作为还原剂用于测试N-乙基马来酰亚胺与巯基反应的特异性。


产品信息:

货号

产品名称

规格

货期

abs9226

DTT溶液(1mol/L)

5mL

现货

abs47002083

DL-二硫苏糖醇(>98%,BR级)

5g/25g

现货

abs42017588

DL-二硫苏糖醇(>97%)

1g/5g

现货


小分子抑制剂产品推荐:

货号

产品名称

规格

货期

abs810012

Brefeldin A

10mg/25mg

现货

abs812852

PMSF

50mg/100mg/200mg

现货

abs810003

U0126

5mg/10mg/25mg/50mg/100mg

现货

abs810466

Cisplatin

5mg/50mg

现货

abs810001

LY 294002

10mg/25mg/100mg

现货

abs812864

Y-27632

5mg/10mg/50mg

现货

abs812972

Poly(I:C)

10mg/50mg

1-2周

abs810008

SP600125

10mg/50mg

现货

abs810744

Erastin

5mg/10mg/50mg/100mg

现货

abs817419

Suramin Sodium Salt

25mg

现货

abs817348

IBMX

25mg/100mg

现货

abs810006

Staurosporine

5mg/25mg

现货

abs812846

Geneticin (G418 Sulfate)

250mg/500mg

现货

abs810030

Rapamycin

5mg/10mg/100mg/1g

现货

abs810575

3-Methyladenine

25mg/50mg/200mg/500mg

现货

abs819421

Prostaglandin E2

5mg/50mg

现货

abs817025

Capsaicin

25mg/50mg/100mg

现货

abs810009

SB202190(FHPI)

5mg/50mg

现货

abs810016

Cyclosporin A

5mg/25mg/50mg

现货

abs810010

PD 98059

5mg/10mg/50mg

现货

abs819747

Nigericin sodium salt

5mg/10mg/25mg

现货

abs812975

Monensin sodium salt

25mg/100mg

现货

abs810716

Doxorubicin hydrochloride

5mg/50mg

现货

abs810020

Paclitaxel

5mg/10mg/25mg/50mg/100mg

现货

abs810481

SB-431542

5mg/10mg/50mg

现货

abs810640

Y-27632 2HCl

5mg/50mg

现货

abs812033

Leupeptin Hemisulfate

5mg/10mg/25mg

现货

abs817902

Pepstatin A

10mg/25mg/50mg/100mg

现货

abs811913

GsMTx4

1mg/5mg

现货

abs814916

Gastrin I (human)

1mg/5mg

现货

abs817694

A-83-01

5mg/10mg/25mg/50mg

现货

abs810052

CHIR-99021(CT99021)

5mg/25mg

现货

abs810473

DAPT

5mg/10mg/50mg

现货

abs810530

Dorsomorphin free base

5mg/50mg

现货

abs810050

Forskolin

5mg/25mg/100mg

现货

abs816969

Nicotinamide

50mg/100mg/200mg/500mg

现货

abs810009

SB202190(FHPI)

5mg/50mg

现货

温馨提示:Absin所有产品仅用于科学研究,请勿药物、家用或其他用途。

Absin特色产品线:


WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...



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