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THP-1细胞培养攻略

更新时间:2023-04-28      点击次数:1328

THP-1 为啥养着贴壁了?

THP-1 养贴壁了还能拯救吗?

THP-1细胞很多贴壁的怎么处理啊?

THP-1复苏后,养不起来咋办?

THP-1聚团正常吗?

THP-1已经养了一周了,还是大量聚团,数量还是没那么多,能扩瓶吗?

最近好多小伙伴咨询 THP-1 细胞培养各种难题,问的最多的还是贴壁问题。通过经验总结和资料查询,今天给大家出一份培养攻略,希望帮到大家。

先做一个简短介绍:THP-1 细胞系最初来自一位急性单核细胞白血病患者的血液,属于悬浮细胞,有分化为多种巨噬细胞的能力,是各领域研究常用的细胞系之一。

 

表1 THP-1(人单核细胞白血病细胞)细胞基本信息

形态

淋巴细胞样

生长特性

悬浮

营养体系

89% RPMI1640基础培养基(abs9484)+10% 胎牛血清优级(abs972)+ 1%双抗(abs9244)+0.1% mM 2- mercaptoethanol(abs9592)

 



图1 1640基础培养基(abs9484)和胎牛血清(特级)(abs972)


图2 THP-1(人单核细胞白血病细胞)

 

THP-1单核细胞正常形态为悬浮的体积较小、透亮的圆形细胞,少数聚团成葡萄状,粒粒饱满,轮廓清晰(如图3)。该细胞在偏酸性环境中,生长更快,所以当培养基稍微变黄(呈橘红色)时,是比较适合细胞生长的,此时补液或半换液即可;开启后的1640培养基,长期放置pH会偏高,建议开封后一周内使用完毕。该细胞对血清要求高,血清质量差异可能引起细胞状态变化,建议选用高质量的胎牛血清


图3 状态良好的THP-1(人单核细胞白血病细胞)

 

首先,我们要讨论的是THP-1贴壁问题。THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况(如图4),不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。但如果当贴壁细胞比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,这时候就需要排查培养箱温度及CO2浓度、培养基成分,以及培养器皿是否异常。可用非TC处理过的培养瓶,不利于细胞贴壁。

 

图4 部分贴壁的THP-1(人单核细胞白血病细胞)

 

然后我们要讨论的是THP-1聚团问题(如图5所示)。THP-1细胞在密度较稀时,有少量细胞聚团属于正常现象不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,细胞会自然分散开。当细胞密度高时,聚团细胞比例高于30%时,并且细胞团呈糜烂状,细胞之间界限不清,胞体质膜有溃烂感,这种情况下的细胞聚团是异常的。若对细胞没有做过任何实验处理,可优先排查营养体系,比如更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。


图5 严重聚团的THP-1(人单核细胞白血病细胞)

 

最后我们要讨论的是关于THP-1复苏不起来怎么办?(如图6所示)该细胞对冻存密度有依赖,冻存密度建议5*106-107/ml;同时复苏密度也有依赖性,建议不低于3*106/ml。当细胞传过几次代,状态较好时,传代密度维持在5*105/ml-106/ml为宜,2*106/ml则需要传代。如有细胞碎片,待细胞密度增大后通过低速离心去除。


图6 复苏状态很差的THP-1(人单核细胞白血病细胞)

 

本期讲解就到这里了,如有细胞培养问题,欢迎扫码加入我们微信群交流。

注:图源网络和客户,仅供参考学习用

 



表2 细胞培养类产品推荐

货号

品名

规格

abs981

胎牛血清(特级)

500ml

abs972

胎牛血清(优级)

500ml

abs974

胎牛血清(标准级)

500ml

abs9483

高糖DMEM培养基

500ml

abs9484

RPMI-1640培养基

500ml

abs9505

MEM培养基

500ml

abs9506

α-MEM培养基

500ml

abs9554

Ham's F-12培养基

500ml

abs9563

Ham's F-12K培养基

500ml

abs9561

DMEM/F-12培养基

500ml

abs962

PBS缓冲液

500ml

abs970

D-PBS缓冲液(不含 Ca2+ Mg2+

500ml

abs971

D-PBS缓冲液(含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs9257

Hanks平衡盐溶液(不含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs9258

Hanks平衡盐溶液(含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs47014938

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚红

100ml

abs47047375

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),不含酚红

100mL

abs9479

无DMSO无血清细胞冻存液

100mL

abs9417

无血清细胞冻存液

100mL

abs9473

细胞冻存液(含血清)

100mL

abs9474

组织保存液

100ml

abs9480

组织冻存试剂盒

30ml

abs9486

模具

1个/套

abs9487

小刀

5片/包

abs9481

组织复苏试剂盒

50ml

abs42020125

卡那霉素B硫酸盐

250mg

abs42018967

硫酸庆大霉素溶液

10ml

abs9244

青链双抗

100ml

abs9245

青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液

100ml

abs42013298

两性霉素B

1g

abs44071148

制霉菌素

1g

abs9246

青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液

100ml

abs9252

支原体检测试剂盒

100T

abs9375

支原体清除试剂

200uL×5

abs9376

支原体预防

500uL×4

abs816578

环丙沙星盐酸盐

500mg

abs9374

水盘抑菌剂

20ml

abs9371

水浴锅抑菌剂

100ml

abs9372

培养箱除菌剂

480ml

abs9373

细胞房除菌剂

480ml




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