Q1:线性mRNA各组件概念及功能?
图1 线性mRNA结构示例
A1:(1)5’-Cap:通常作为mRNA的起始结构,帽子结构可以使得mRNA进入体内以后开始翻译,并维持mRNA的稳定性。
(2)UTR(Untranslated Regions):即非翻译区,是mRNA分子两端的非编码片段。5'-UTR从mRNA起点的甲基化鸟嘌呤核苷酸帽延伸至AUG起始密码子,3'-UTR从编码区末端的终止密码子延伸至多聚A尾巴(Poly-A)的前端。5'-UTR,可以提高mRNA在体内翻译的效率;3'-UTR,可以提高mRNA的翻译效率。
(3)CDS序列(Coding sequences):一般可以在NCBI上查到,是与蛋白区域一一对应的序列,并且序列中间不存在其他与蛋白无关的序列,和真实情况最为接近。不同物种的CDS序列有一定的偏好性,因此,对CDS区域进行广泛的筛选和设计显得尤为关键,优化的CDS区域不仅可以提高mRNA的翻译效率,同时修饰碱基的使用,可以进一步的降低mRNA在体内的免疫原性,增强药物表现。开放阅读框ORF(Open reading frame)它是理论上的蛋白编码区,一般是先在序列中寻找起始密码子(AUG)对应的序列ATG,然后按每3个碱基一组向后延伸,一直到出现终止密码子(UAG、UGA、UAA)对应的序列。
(4)Poly(A)tail:进一步提高mRNA的稳定性,提高mRNA的翻译效率。
Q2:环状RNA中IRES结构及功能?
图2 环状mRNA结构示例
A2:IRES为核糖体的结合位点,该结构可启动环状mRNA的翻译,它跟线性mRNA的帽结构类似。IRES避免了环状mRNA必须添加昂贵的5’端帽子和繁琐的Poly(A)尾巴。
Q3:环状RNA环化的方式是什么?
A3:参考Anderson发表的文章,本公司环状mRNA环化的方式是添加同源臂内含子自剪切方式。
Q4:线性mRNA中5种修饰碱基各有什么区别和作用?
A4:不同核苷酸修饰表现出不同的功能和作用,其中假尿苷修饰和甲基假尿苷修饰是应用最为广泛的,具体选择哪一种修饰应当根据实验确定。
(1)Pseudo-UTP(Ψ)假尿苷:改变密码子、增强转录本稳定性和应激反应应答。降低mRNA免疫原性,提高mRNA稳定性并增强其翻译能力;
(2)N1-Methylpseudo-UTP(mΨ)甲基假尿苷:通过增加核糖体密度以elF2α依赖性和独立机制增强翻译,比假尿苷修饰更能降低mRNA免疫原性,并可增强mRNA的蛋白表达能力;
(3)N6-Methyl-ATP(m6A):与mRNA稳定性、剪接加工以及microRNA 加工有关,可促进mRNA翻译;
(4)5-Methyl-CTP(5mC):5mC修饰连同多种效应酶,执行多种功能; 5mC的分布因细胞类型而异,在mRNA特定位置上的5mC修饰表现出不同的调控活性:它们可以促进或抑制翻译;
(5)5-Methoxy-UTP(5moU):可以降低所得mRNA的免疫原性,促进蛋白表达,对炎性巨噬细胞反应的诱导可忽略不计。
Q5:修饰碱基、帽结构一般推荐什么或者通用的是什么?
A5:我司一般用N1-甲基-假尿苷(N1-Methylpseudo-UTP)修饰碱基进行合成产品。通用帽结构采用的是Cap1 AG(化学共转录法加帽),客户若有附加质控,我们可提供Cap ratio检测。
Q6:Fluc mRNA表达的是什么荧光素?
A6:FLuc mRNA表达了一个最初从萤火虫中提取的萤光素酶蛋白,可以催化萤火虫萤光素D-Luciferin氧化成发光物质,发出黄绿色萤光。
Q7:Fluc-mRNA带cy5荧光标记的,做实验的时候需要避光吗?
A7:最好将Fluc-mRNA进行避光实验操作、避光保存,因为要防止荧光淬灭影响实验结果。
Q8:mRNA保存条件是什么?
A8:需要低于-40°C保存,-80℃冰箱或液氮保存都可以,AG8亚国服务所提供的均为新鲜生产的产品,为了达到最佳使用效果,请在收到货物的2个月内使用。若不小心将mRNA短期(例如1天)存放于-20℃,可以在正式实验之前将mRNA跑琼脂糖凝胶电泳看其是否降解。
Q9:mRNA未添加帽结构一般可以存放多久呢?
A9:mRNA添加了加帽结构我们建议可以-40℃保存2个月,未加帽的mRNA需要尽快使用,因为未添加帽结构的mRNA稳定性会降低,mRNA会受到核酸外切酶的降解。
Q10:mRNA保存液主要有哪几种?有什么区别?
A10:我司的mRNA保存溶剂主要有柠檬酸钠盐溶液和无核酸酶水两种。柠檬酸钠盐溶液更适合动物体内的生理环境,如果是注射动物可以选择用柠檬酸钠盐溶液保存mRNA;如果是mRNA做包裹后推荐使用无核酸酶水进行保存;如果是做细胞处理实验,无核酸酶水及柠檬酸钠盐溶液都可以选择,任选其一即可。
Q11:工具RNA的溶剂是什么?
A11:我司的工具mRNA通用溶剂一般是1mM柠檬酸钠盐溶液,pH为6.4。
工具mRNA --线性mRNA
货号 | 产品名称 | 规格 | 产品特征 |
abs60174 | Cas9 mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60190 | Cas9 nickase mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60176 | EGFP mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60178 | Fluc mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60180 | mcherry mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60192 | EBFP mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60193 | ECFP mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60195 | mBanana mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60196 | mHoneydew mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60197 | mKate mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60198 | mOrange mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60199 | mPlum mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60311 | mtangerine mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60313 | tdTomato mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60314 | YFP mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60191 | Cre mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60194 | EPO mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60312 | OVA mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
abs60315 | β-gal mRNA | 100ug×10 | 新鲜现货 |
备注:所有线性RNA均使用Cap AG结构共转录加帽,修饰碱基5种可任选其一(5-Methoxy-UTP,5-Methyl-CTP,N1-Methylpseudo-UTP,N6-Methyl-ATP,Pseudo-UTP。) |
工具mRNA --环状mRNA
货号 | 产品名称 | 规格 | 产品特征 |
abs60332 | Endless eGFP mRNA | 50ug | 新鲜现货 |
abs60333 | Endless Fluc mRNA | 50ug | 新鲜现货 |
abs60334 | Endless mcherry mRNA | 50ug | 新鲜现货 |
abs60335 | Endless Cas9 mRNA | 50ug | 新鲜现货 |
abs60336 | Endless EPO mRNA | 50ug | 新鲜现货 |
Absin特色产品线:
WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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