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mRNA常见FAQ合集Ⅰ/有问题先找FAQ!

更新时间:2023-06-19      点击次数:707

Q1:线性mRNA各组件概念及功能?



图1 线性mRNA结构示例

 

A1(1)5’-Cap:通常作为mRNA的起始结构,帽子结构可以使得mRNA进入体内以后开始翻译,并维持mRNA的稳定性。

2)UTR(Untranslated Regions):即非翻译区,是mRNA分子两端的非编码片段。5'-UTR从mRNA起点的甲基化鸟嘌呤核苷酸帽延伸至AUG起始密码子,3'-UTR从编码区末端的终止密码子延伸至多聚A尾巴(Poly-A)的前端。5'-UTR,可以提高mRNA在体内翻译的效率;3'-UTR,可以提高mRNA的翻译效率。

3)CDS序列(Coding sequences):一般可以在NCBI上查到,是与蛋白区域一一对应的序列,并且序列中间不存在其他与蛋白无关的序列,和真实情况最为接近。不同物种的CDS序列有一定的偏好性,因此,对CDS区域进行广泛的筛选和设计显得尤为关键,优化的CDS区域不仅可以提高mRNA的翻译效率,同时修饰碱基的使用,可以进一步的降低mRNA在体内的免疫原性,增强药物表现。开放阅读框ORF(Open reading frame)它是理论上的蛋白编码区,一般是先在序列中寻找起始密码子(AUG)对应的序列ATG,然后按每3个碱基一组向后延伸,一直到出现终止密码子(UAG、UGA、UAA)对应的序列。

4)Poly(A)tail:进一步提高mRNA的稳定性,提高mRNA的翻译效率。



Q2:环状RNA中IRES结构及功能



图2 环状mRNA结构示例

 

A2:IRES为核糖体的结合位点,该结构可启动环状mRNA的翻译,它跟线性mRNA的帽结构类似。IRES避免了环状mRNA必须添加昂贵的5’端帽子和繁琐的Poly(A)尾巴。



Q3:环状RNA环化的方式是什么?

A3参考Anderson发表的文章,本公司环状mRNA环化的方式是添加同源臂内含子自剪切方式。



Q4:线性mRNA5种修饰碱基各有什么区别和作用?

A4不同核苷酸修饰表现出不同的功能和作用,其中假尿苷修饰和甲基假尿苷修饰是应用最为广泛的,具体选择哪一种修饰应当根据实验确定。

(1)Pseudo-UTP(Ψ)假尿苷:改变密码子、增强转录本稳定性和应激反应应答。降低mRNA免疫原性,提高mRNA稳定性并增强其翻译能力;

(2)N1-Methylpseudo-UTP(mΨ)甲基假尿苷:通过增加核糖体密度以elF2α依赖性和独立机制增强翻译,比假尿苷修饰更能降低mRNA免疫原性,并可增强mRNA的蛋白表达能力;

(3)N6-Methyl-ATP(m6A):与mRNA稳定性、剪接加工以及microRNA 加工有关,可促进mRNA翻译;

(4)5-Methyl-CTP(5mC):5mC修饰连同多种效应酶,执行多种功能; 5mC的分布因细胞类型而异,在mRNA特定位置上的5mC修饰表现出不同的调控活性:它们可以促进或抑制翻译;

(5)5-Methoxy-UTP(5moU):可以降低所得mRNA的免疫原性,促进蛋白表达,对炎性巨噬细胞反应的诱导可忽略不计。



Q5:修饰碱基、帽结构一般推荐什么或者通用的是什么?

A5:我司一般用N1-甲基-假尿苷(N1-Methylpseudo-UTP)修饰碱基进行合成产品。通用帽结构采用的是Cap1 AG(化学共转录法加帽),客户若有附加质控,我们可提供Cap ratio检测。

 

Q6Fluc mRNA表达的是什么荧光素?

A6FLuc mRNA表达了一个最初从萤火虫中提取的萤光素酶蛋白,可以催化萤火虫萤光素D-Luciferin氧化成发光物质,发出黄绿色萤光。



Q
7:Fluc-mRNA带cy5荧光标记,做实验的时候需要避光吗?

A7:最好将Fluc-mRNA进行避光实验操作、避光保存,因为要防止荧光淬灭影响实验结果。



Q8:mRNA保存条件是什么?

A8需要低于-40°C保存,-80℃冰箱或液氮保存都可以,AG8亚国服务所提供的均为新鲜生产的产品,为了达到最佳使用效果,请在收到货物的2个月内使用。若不小心将mRNA短期(例如1天)存放于-20℃,可以在正式实验之前将mRNA跑琼脂糖凝胶电泳看其是否降解。


Q9:mRNA未添加帽结构一般可以存放多久呢?

A9mRNA添加了加帽结构我们建议可以-40℃保存2个月,未加帽的mRNA需要尽快使用,因为未添加帽结构的mRNA稳定性会降低,mRNA会受到核酸外切酶的降解。 


Q10:mRNA保存液主要有哪几种?有什么区别?

A10:我司的mRNA保存溶剂主要有柠檬酸钠盐溶液和无核酸酶水两种。柠檬酸钠盐溶液更适合动物体内的生理环境,如果是注射动物可以选择用柠檬酸钠盐溶液保存mRNA;如果是mRNA做包裹后推荐使用无核酸酶水进行保存;如果是做细胞处理实验,无核酸酶水及柠檬酸钠盐溶液都可以选择,任选其一即可。


Q11:工具RNA的溶剂是什么?

A11我司的工具mRNA通用溶剂一般是1mM柠檬酸钠盐溶液,pH为6.4。


工具mRNA --线性mRNA

货号

产品名称

规格

产品特征

abs60174

Cas9 mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60190

Cas9 nickase mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60176

EGFP mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60178

Fluc mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60180

mcherry mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60192

EBFP mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60193

ECFP mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60195

mBanana mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60196

mHoneydew mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60197

mKate mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60198

mOrange mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60199

mPlum mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60311

mtangerine mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60313

tdTomato mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60314

YFP mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60191

Cre mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60194

EPO mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60312

OVA mRNA

100ug×10

新鲜现货

abs60315

β-gal mRNA

100ug×10

新鲜现货

备注:所有线性RNA均使用Cap AG结构共转录加帽,修饰碱基5种可任选其一(5-Methoxy-UTP,5-Methyl-CTP,N1-Methylpseudo-UTP,N6-Methyl-ATP,Pseudo-UTP。)

 




工具mRNA --环状mRNA

货号

产品名称

规格

产品特征

abs60332

Endless  eGFP mRNA

50ug

新鲜现货

abs60333

Endless  Fluc  mRNA

50ug

新鲜现货

abs60334

Endless  mcherry mRNA

50ug

新鲜现货

abs60335

Endless  Cas9 mRNA

50ug

新鲜现货

abs60336

Endless  EPO mRNA

50ug

新鲜现货

 


 

Absin特色产品线:

WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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