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Absin一种类器官药敏活性检测方法

更新时间:2023-07-27      点击次数:483

类器官在药敏药筛这块的活力检测方法采用ATP生物发光技术的方法相对其它方法更简便,更准确。小爱带您了解一下检测方法吧。

 

1ATP生物发光技术原理

 

在类器官细胞培养物中加入相应试剂使类器官裂解,释放ATP,荧光素酶催化底物荧光素的转化,高效利用ATP的能量,发射光子形成光信号。发光强度与ATP在一定范围内成正比,而ATP又与活细胞数目又呈正比,因此可以对类器官活细胞数目进行定量检测。


 

2类器官ATP生物发光方法

 

(1)类器官的准备

使用适合进行发光检测的24孔板,每孔接种类器官与基质胶混合物25ul平铺到孔底部,同时设置不含类器官的基质胶与培养液孔作为阴性对照,按照类器官培养的常规方法培养类器官。如有需要,可加入药物处理类器官。此外,如有必要也可以设置类器官的浓度梯度,以便后续确定试剂盒的使用效果。

 

(2)试剂准备

a. 融化:将ATP活性检测试剂盒置于2~8℃或室温条件下融化;
b. 使用前轻柔颠倒几次使溶液混合均匀。

 

(3)检测步骤

a. 于培养箱中取出待测类器官培养板,室温放置30min,以使培养板温度平衡至室温;
b. 加入与待测类器官培养物等体积并平衡至室温的缓冲液(abs9730)。例如,使用24孔培养板时,先去除类器官培养基,用类器官缓冲液置换静置清洗3次,然后吸取25μl本品加入25μl待测类器官培养物中(加入体积与基质胶团混合物体积一致);
c. 剧烈振荡5min使类器官充分裂解;室温放置25min以稳定发光信号,即可进行检测;
d. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1s或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整;
e. 根据化学发光读数直接计算类器官的相对活力,或根据ATP标准曲线计算出ATP的量从而计算出类器官细胞的相对活力。类器官在0-30个类器官/孔的类器官密度范围内有良好的线性关系,ATP标准品0-10,000nM浓度范围有良好的线性关系;

 

注:检测效果因类器官的种类不同而有所不同,对于一些ATP含量特别高的类器官,在类器官数量达到100个后可能会不呈现线性相关,但化学发光读数还是会继续升高的。

 

(4)ATP 标准曲线的设置(选做):

把自备的ATP标准溶液用PBS或类器官培养液稀释成适当的浓度梯度。初次检测可以设置0、10、30、100、300、1000、3000、10,000nM这几个浓度,24孔板每孔加入100μl的标准品。如有必要,在后续的实验中可以根据类器官中的ATP含量对标准品的浓度范围进行适当调整。如果用类器官培养液来稀释ATP标准品,稀释后需立即进行后续的发光检测,否则培养液中的ATPase等可以消耗ATP的酶会导致ATP含量下降。

 

今天讲解就到这了,大家如有类器官活力检测问题,欢迎入群交流哦!


 

货号

品名

规格

abs9444

Organotial人肝癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人结直肠癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人肺癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人胃癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人胰腺癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人鼻咽癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人乳腺癌类器官培养基试剂盒

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abs9558

Organotial人卵巢癌类器官培养基试剂盒

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abs9590

Organotial人宫颈癌类器官培养基试剂盒

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abs9448

Organotial人子宫内膜癌类器官培养基试剂盒

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Organotial人脑胶质瘤类器官培养基试剂盒

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abs9743

Organotial人前列腺癌类器官培养试剂盒

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Absin特色产品线:

WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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