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多重荧光免疫组化Q&A(第四弹)

更新时间:2024-02-28      点击次数:406

简介

 

多重荧光免疫组化技术(简称多色)基于酪氨酸信号放大 (Tyramide dignal amplification,TSA) 技术,是一类利用辣根过氧化酶 (HRP) 对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。

 

带有染料标记的底物酪胺分子在过氧化氢氧化环境下,被抗体或探针固定的HRP转化为具有短暂活性的中间状态,然后被激活的中间态分子迅速与相接蛋白分子的富含电子区域(酪氨酸残基)进行稳定的共价结合。

 

图1 酪胺Tyramide的过氧化物酶反应

 

为什么选择多色?多色技术的优点

 

1、同时标记多种蛋白(最多9标10色);

2、一抗来源不再受限(同种属多标);

3、连接辣根过氧化物酶的同种属二抗;

4、强荧光防淬灭。

 

本期主要讲解客户对说明书的一些疑惑,说明书常见问题一网打尽!!!

 

图2 AG8亚国服务多色试剂盒

 

重要提示!!!

 

新的一年AG8亚国服务部分多色试剂盒染料和抗体更新,例如旧版本TSA520外观是白色透明新版本是黄色,老用户不要误会染料质量问题!

版本更新之后,新旧试剂盒请不要掺杂,试剂盒需配套使用!

 

图3 新版染料TSA520

 

AG8亚国服务多色试剂盒说明书问题解析

 

1、脱蜡水合步骤中10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次"目的是什么?我们以前做石蜡切片的时候没有这一步。

 

答:这是后固定的步骤,固定充分的组织可以省略此步。

 

2、微波修复抗原每一轮染色都要做吗?可以用抗体洗脱液替代吗?抗体洗脱液用在哪个步骤?

 

答:染第一个抗体之前做抗原修复,是为了使被石蜡或者固定剂封闭的抗原决定簇重新暴露出来,使得抗体能够识别到抗原;在染后面每一个抗体之前的抗原修复,目的是为了去除掉上一轮染色的抗体和残留没有结合上的染料,其实更准确的叫法是“抗体洗脱",也就是说第一次的抗原修复是真正的抗原修复,后面的抗原修复实际上是“抗体洗脱",“抗体洗脱"可以用抗体洗脱液(abs994)替换,特别是细胞、冰冻切片或者骨样本,但第一次抗原修复不能被抗体洗脱液替代,冰冻切片可以不进行抗原修复,染色效果欠佳时,可以考虑尝试进行抗原修复,推荐冰冻切片快速抗原修复液(5×)(abs9207)

 

3、需要进行内源性过氧化氢封闭吗?在哪一步进行?是每轮都要做吗?

 

答:需要进行内源性过氧化氢封闭,详细的步骤是在血清封闭之前,3%的过氧化氢甲醇溶液室温封闭10-15min,PBST洗三遍,再加血清封闭,过氧化氢封闭做一次就好了。

 

4、染DAPI之前是否还需要进行抗原修复(指抗体洗脱)?

 

答:理论上是需要的,但是如果是冰冻切片经过多轮洗脱之后,有很大的脱片风险,这种情况下,宁愿背景不太干净,也不希望脱片,这一步可以不进行抗原修复。

 

多色试剂盒买二送一!!! 活动时间:2024年2月20日-3月31日


货号

产品名称

规格

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七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔通用二抗)

20T/100T

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七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(plus)(鼠兔通用二抗)

20T/100T

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七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(抗兔二抗)

20T/100T

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七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(plus)(抗兔二抗)

20T/100T

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六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔通用二抗)

20T/100T

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六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(plus)(鼠兔通用二抗)

20T/100T

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六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(抗兔二抗)

20T/100T

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六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(plus)(抗兔二抗)

20T/100T

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五色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔通用二抗)

20T/100T

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五色多重荧光免疫组化染色试剂盒(抗兔二抗)

20T/100T

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四色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔通用二抗)

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四色多重荧光免疫组化染色试剂盒(抗兔二抗)

20T/100T




 

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