苏木素-伊红(HE)染色试剂盒

苏木素-伊红(HE)染色试剂盒实验流程：
1.需要用户自己准备的试剂
a.固定液：4%多聚甲醛/通用型组织固定液(abs9179；
b.分化液：5%的乙酸溶液或0.5%的盐酸乙醇；

c.如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，和封片剂(如中性树胶(镜检用封片剂)abs9177），及80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇；

d.70%乙醇。
2.样品处理
a.对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5-10分钟；
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟；
无水乙醇5分钟；
90%乙醇2分钟；
80%乙醇2分钟；
70%乙醇2分钟；
蒸馏水2分钟。
b.对于冰冻切片：
固定液固定10分钟以上；
蒸馏水2分钟。
c.对于培养细胞：
固定液固定10分钟以上；
蒸馏水洗涤2分钟；
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。
3.苏木素：水化后，组织切片用苏木素染色 1~3min，可根据染色结果和要求调整染色时间。 苏木素是一种基本染料，可以对细胞的酸性成分进行染色，包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白， 将他们染成蓝-紫色。 注意：没有苏木素，伊红会将组织染成亮粉红色；显而易见的是缺乏细胞核。组织结构很难 区分，细胞内成分几乎都不存在，难以辨别。
4.水洗：苏木素染色后，用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗，可将多余的 染料，媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽，金属光泽可阻止苏木素的染色。 注意：跳过此步，将产生不好的结果，例如沉淀的形成，染液的稀释，表面金属光泽的存在。
5.酸酒精：酸酒精分色剂 3~5sec。在苏木素染色方法中，组织切片有意过度染色，酸酒精 将去除多余的染料以及玻片上的背景染色。 注意：如果没有此步骤，组织切片将变为暗紫色。嗜酸结构，例如，胶原，将不会呈现明亮 的粉红色。组织结构之间将很难区分。很难对切片做出正确的判断。 分色过度可能是由于： 1)酸浓度过高； 2)脱色时间过长等。 分色不足是由于： 1)酸浓度过低； 2)脱色时间不足； 3)在切片上有多余的蛋白或者明胶等。
6.水洗：水洗 30sec，终止酸酒精反应，进一步阻止酸酒精从组织切片上将大量苏木素去除。 注意：如果切片没有经过漂洗，酸酒精可以过度脱色。如果不去除脱色剂，酸酒精将持续从 组织切片上去除苏木素。
7.自来水冲洗或用蓝化液蓝化：自来水冲洗 3~5min，可起到发蓝处理，将紫红色的苏木素 转变为蓝紫色。通常，发蓝试剂是 pH 依赖性的，由碱性溶液构成。因此，如果自来水作为 发蓝试剂，pH 值的每天监控是非常重要的，因为自来水的 pH 值可能每天都会波动。 或用蓝化液蓝化，30sec~1min；流动的自来水冲洗 5min； 注意：跳过发蓝试剂步骤，将会导致苏木素染液的颜色发生微妙的变化，难以区分。代替深 蓝色，细胞核将呈现紫色，有时甚至是红色。细胞核不可过度蓝染。如果组织染色过蓝，一 般是在组织切片上苏木素过多所致。
8.水洗：为伊红复染做准备，通过水洗 30sec，将多余的发蓝试剂去除。因为在碱性环境下， 伊红无法染色，水洗去除发蓝试剂将允许伊红保持其酸性 pH 值，使伊红得以均匀复染。 注意：发蓝试剂之后，如果没有水洗，组织切片无法正确使用伊红染色。因此，酸性结构将 被染为苍白色并且不均匀，进而导致错误的判断。
9.伊红：为了正确区分胞内结构，伊红是出色的苏木素复染剂。伊红复染 30~60sec，可根 据染色结果和要求调整染色时间。伊红是酸性染料，可染细胞质，尤其是线粒体、分泌颗粒 和胶原。它可以区分细胞内不同的细胞器以及不同的结缔组织。 注意：使用伊红复染组织切片的失败，将导致组织切片的低分化。 染色较弱是由于： 1）组织切片过薄； 2）染色时间不足； 3）随后 95%酒精分化过度。 染色过度是由于： 1）染液浓度较高（可能是由于过度蒸发）； 2）组织切片过厚； 3）染色时 间过长； 4）随后 95%酒精分化不足。 伊红染色未分化（一种颜色）是由于： 1）固定不*； 2）过度染色，a）染色时间过长；b）染液浓度过高。
10.95%乙醇：95%乙醇处理 2 s~1 min，根据染色结果和要求调整；伊红分化将产生不同的 粉色。 注意：如果 95%乙醇被稀释（例如，从前一步染色中携带了伊红），分化的效果较差。
11.100%乙醇：通过 100%乙醇使组织切片脱色。100%乙醇处理 1 min；再用新的 100%乙醇 处理 1 min。 注意：这一步很难引起注意，若无 95%乙醇，难以区分酸性结构，组织切片成为粉色。若 无 100%乙醇脱水，组织切片不能*脱水，导致在盖片下形成水珠。这些水珠可与下一步 的二甲苯结合而形成白色混浊物，这将影响组织切片的质量。
12.二甲苯：二甲苯处理 5min。在充分脱水后，二甲苯可将组织切片上的酒精去除。去除酒 精后，在载玻片上加盖玻片时，二甲苯也可作为包埋剂确保可溶解。由于有潜在的毒性，二 甲苯替代品，例如环烷烃也可使用。替代品可提供相同的组织染色质量，并且他们 使用更安全，操作更简单。 注意：当跳过此步骤时，不使用二甲苯透明，酒精将会保存于组织切片上，导致伊红从切片 上流出。
13. 封片：中性树胶封片，自然风干或烤干，显微镜观察。

避光储存于室温，有效期12个月。

HE 染色是一个对经验要求非常高的染色，实验流程中所提供的染色时间都是参考时间，要根据实验原理，结合具体情况而定。