质粒DNA转染试剂盒（贴壁细胞）

产品介绍：
这款产品是在DeofectEU Transfection Reagent的基础上进一步优化研发成功的专门用于质粒DNA细胞转染的转染试剂。它具有非常好的转染性能，可高效转染多种贴壁细胞、原代细胞和悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中高达90%以上（EGFP质粒）。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，它采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率不到10%。这款产品使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。

产品特点：
1、强大的细胞转染性能：可高效转染多种贴壁细胞、原代细胞和悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中高达90%以上；
2、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响，实验结果更为客观；
3、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

方法步骤（以24孔板转染为例）:

A、细胞接种:
1、转染前24小时左右对细胞进行转接，培养过夜。
2、确保转染时细胞密度为90%左右。
3、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B、R /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1、在1.5ml无菌离心管中加入50ul Trans buffer，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、在1.5ml无菌离心管中加入50ul Trans buffer，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、将DNA-Trans buffer混合物滴加至R-Trans buffer混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后，立即转染。

注意： R-Trans buffer混合物和DNA-Trans buffer混合物的混合顺序非常重要，切勿颠倒。注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24-48小时。
3、R在培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入R/DNA复合物12-24小时后进行。

储存/保存方法：

-20℃避光保存，Trans buffer 可保存于2-8°C，有效期1年，使用前轻轻混匀。

技术指标：

附表：不同培养体系推荐初始转染条件

产品用途：

适用细胞系：293T，A549，B16F10，HEK 293，HeLa，Hepa 1-6，Hepa 1cLc7，HepG2，BHK-21，BNL.CL2，BRL-3A，C2C12，C6，CHO-K1，Clone 9，COS-1，COS-7，Daoy，DBTRG-05MG，DI-TNC1，DU 145，HLF-a，Huh-7，K562，KB，KLN 205，Lυ2 (LLC1)，NCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR3， PC3，PC-12等。

注意事项：

1、转染前的细胞汇合度以90%左右为宜，转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。

2、刚开始转染，建议进行优化实验，如24孔培养板，每孔质粒用量 0.8ug，转染试剂用量可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。

3、应避免转染复合物制备体系中存在血清，因血清会干扰R与 DNA形成复合物，培养基中尽量不要使用抗生素。

4、如果需要稳转，请在转染24-48小时后加入筛选培养基。

5、本试剂盒主要用于质粒DNA转染，如需质粒DNA、RNA、siRNA均可转染的试剂，请选择核酸转染试剂盒（#abs60259）。