核酸转染试剂盒

产品介绍：
该产品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基础上进一步研发成功的专门用于核酸高效转染的试剂盒。它具有非常好的转染性能，可高效转染绝大多数贴壁细胞，转染效率可高达90%以上（Hela细胞，EGFP质粒）。其功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。

与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，该试剂盒采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后24小时细胞几乎无明显死亡。它使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。它适合于贴壁细胞的核酸转染，如需转染原代细胞，请选择原代细胞核酸转染试剂盒（abs60324）。如需转染悬浮细胞，请选择悬浮细胞核酸转染试剂盒（abs60325）。

产品特点：
1、强大的细胞转染性能：可高效转染多种贴壁细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上；
2、转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；
3、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
4、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

试剂盒包装：

转染效率：可高效转染多种贴壁细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上；
细胞死亡率：死亡率不到10%

操作步骤：

一、质粒DNA转染（以24孔板转染为例）:

A、细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接，每孔接种0.8-1.2×105个细胞，使转染时细胞密度为90%左右，且生长良好（非常重要）；
2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B、试剂B /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):
1、在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，并加入适量的试剂A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、 将DNA-培养基混合物滴加至试剂B-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后，立即转染。注意： 试剂B-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24-48小时。
3、试剂B在培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

二、siRNA转染（以24孔板转染为例）:

A、 细胞接种:
1、转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；
2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B、试剂B /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):
1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
2、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。
3、将siRNA-培养基混合物滴加至试剂B-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后，立即转染。

C、转染:
1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2、37°C培养24-72小时，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6小时可以更换培养基，但不是必须。
3、 试剂B 在培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

储存/保存方法：

-20°C 保存，使用前请轻轻混匀；有效期1年。

技术指标：

附表 1：质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

附表 2：siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件

产品用途：

可高效转染绝大多数贴壁细胞，转染效率可高达90%以上（Hela细胞，EGFP质粒）。试剂A功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。

注意事项：

1、刚开始转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8 ug， 试剂B 可选择2.0 ul、2.5 ul、3.0 ul、3.5 ul进行优化。24孔板siRNA转染，试剂B 用量2.0 ul，siRNA用量可选10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol进行优化。
2、 在制备DNA或siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清，因血清会干扰试剂B 与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。
3、试剂A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入试剂A。
4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。
5、如果需要质粒稳转，请在转染24-48小时后加入筛选培养基。
6、 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用核酸共转染试剂盒。
本产品仅用于科学研究，不得用于医学临床用途。

*温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究