多重荧光免疫组化 | T细胞分型

在免疫组化研究中，通过使用针对这些标志物的特异性抗体，可以对T细胞的不同亚群进行鉴定和分析。这有助于研究T细胞在免疫反应中的作用，特别是在肿瘤免疫微环境中的功能。接下来就和小爱一起来了解一下T细胞的分型~

一、T细胞背景介绍

T细胞是一群起源于骨髓，成熟于胸腺，在外周免疫器官组织活化，在血液、淋巴循环，在病变部位发挥效应的异质性细胞。

T细胞不产生抗体，而是直接通过抗原特异性受体识别病原体。 T细胞在胸腺中分化并作为CD4+辅助T细胞或CD8+细胞毒性T细胞协调免疫反应。

T细胞主要从两方面为免疫反应做出贡献：一些细胞负责直接杀死感染或癌变的细胞。另一些细胞负责指导和调节免疫反应进程，如辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等。根据T细胞在分化和发育的过程中所表达的特征性分子，可以对T细胞进行最常见的简单分类。

按TCR类型：αβT细胞、γδT细胞；

按共刺激分子：CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞；

按功能：Th细胞、Tc细胞、Treg细胞；

按活化阶段：初始(naive)T细胞、效应(effector)T细胞、记忆性(memory)T细胞。

二、T细胞的活化

研究表明，诱导T细胞的活化与增殖需要两种信号：一种是TCR/CD3与抗原提呈细胞(APCs)表面特异的MHCⅡ抗原肽复合物结合产生的特异性抗原刺激信号；另一种是非特异性协同刺激信号，由APCs 表面的协同刺激分子和T细胞的相应受体相互作用后产生，其中CD28/B7是最为重要的协同刺激分子，能增加IL-2的产生，加速T细胞增殖，阻止细胞进入无反应状态或死亡。

T细胞活化的第一信号：APC将pMHC提呈给T细胞，TCR特异性识别结合在MHC分子槽中的抗原肽，导致CD3与共受体（CD4或CD8）的胞浆段相互作用，使得T细胞初步活化。这是T细胞活化的第一信号（抗原刺激信号），同时与T细胞接触的APC也被活化，并上调共刺激分子等活化相关分子的表达。

T细胞活化的第二信号：T细胞与APC细胞表面多对共刺激分子相互作用产生T细胞活化所需的第二信号（共刺激信号），导致T细胞全部活化。活化T细胞诱导性表达一系列细胞因子和细胞因子受体，而活化的APC也产生多种细胞因子，这些均为T细胞增殖和分化奠定基础。如缺乏共刺激信号，第一信号非但不能有效激活特异性T细胞，反而导致T细胞失能。

细胞因子促进细胞的增殖和分化：T细胞全部活化后，多种细胞因子的刺激作用才能进一步增殖和分化。其中IL-1和IL-2对T细胞增殖至关重要；其他细胞因子参与T细胞的分化。如果没有细胞因子，活化T细胞不能增殖和分化，导致T细胞活化后凋亡。

三、T细胞上的受体因子

T细胞上有很多受体因子共同参与T细胞的发育、激活、增殖、分化和效应功能，是T细胞发挥免疫应答作用的基础。了解这些受体的生物学特性和功能对于研究T细胞的免疫机制和开发免疫相关治疗策略具有重要意义。

杀伤性T细胞（细胞毒性T淋巴细胞：CD8+），这种细胞可识别抗原，抗原由与宿主细胞结合的致病原释放。杀伤性T细胞能够识别不同的细胞类型和病原体并与其发生相互作用。T细胞受体结合外来抗原，触发细胞毒素释放进入受感染的细胞，导致细胞死亡；

辅助T细胞（Th细胞：CD4+），可促进免疫系统对抗感染。Th细胞识别并结合致病抗原，导致可溶性因子（细胞因子）的释放，进而将信号传导至免疫系统的其余部分以启动应答。Th细胞分为不同的亚型，包括Th1细胞和Th2细胞。Th1细胞可结合具有吞噬功能的巨噬细胞和树突细胞。Th2细胞结合和激活B细胞，这是产生抗体的必要过程，从而保证对特定细菌或病毒感染的终生免疫力；

调节性T细胞（Treg细胞：CD4+、CD25+、Foxp3+、CD127+），可保持免疫系统功能正常。一旦发生了免疫反应，这类细胞可确保反应得到终止。这种调节机制抑制了免疫活性，从而防止过度免疫反应。正常运作的Treg细胞对预防自身免疫病至关重要。

T细胞受体(TCR)：T细胞受体是T细胞特异性识别抗原的主要分子，由α和β或γ和δ链组成，形成TCRαβ或TCRγδ；

主要组织相容性复合体(MHC)分子： T细胞通过TCR识别由MHC分子呈递的抗原肽段。CD4+T细胞识别MHC II类分子，而CD8+T细胞识别MHC I类分子；

CD3复合物：CD3是T细胞表面的一个重要标志物，与TCR共同组成TCR-CD3复合物，参与T细胞的激活；

共刺激分子：如CD28、CTLA-4、ICOS等，它们与APC（抗原递呈细胞）表面的B7家族分子(CD80/CD86)相互作用，提供T细胞激活的第二信号；

CD4和CD8：CD4和CD8是T细胞表面辅助受体，分别与MHC II类和MHC I类分子结合，增强T细胞对抗原的识别；

细胞因子受体：T细胞表面表达多种细胞因子受体，如IL-2R、IL-7R、IL-12R等，这些受体与其配体结合后，调节T细胞的存活、增殖和分化；

检查点分子：如PD-1、CTLA-4、TIM-3等，这些分子参与调节T细胞的激活和抑制，维持免疫反应的平衡；

细胞黏附分子：如CD2、LFA-1(CD11a/CD18)、CD58等，它们参与T细胞与APC之间的黏附，促进免疫突触的形成；

趋化因子受体：如CCR7、CXCR3等，它们指导T细胞迁移至炎症部位或淋巴组织；

转录因子： 如T-bet、GATA3、RORγt、FoxP3等，它们在T细胞分化为特定亚群时起关键调控作用。

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