PM原代细胞核酸转染试剂盒

产品介绍：

    PM原代细胞核酸转染试剂盒是专门用于核酸原代细胞高效转染的试剂盒。它具有非常好的转染性能，可高效转染绝大多数原代细胞，转染效率可高达 85%以上（EGFP 质粒）。其功能强大，不仅可高效转染较大分子的质粒 DNA，还可高效转染 mRNA、siRNA、mimics 和各种小分子 DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，它采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后 24 小时细胞几乎无明显死亡。使用也非常方便，先将转染试剂与质粒 DNA 混合，再将转染试剂-DNA 复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。 

产品特点：

1、强大的细胞转染性能：可高效转染多种原代细胞，转染效率在原代细胞中可高达85%以上；

2、转染功能强大，不仅可高效转染大分子质粒DNA，还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA；

3、极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；

4、操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

操作步骤：

一、质粒DNA 转染（以24 孔板转染为例）:

A、细胞接种:

1、 转染前一天对细胞进行转接，每孔接种0.8-1.2×10 5 个细胞，使转染时细胞密度为90%左右，且生长良好（非常重要）；

2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B、PM /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):

1、在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，再加入适量的PM转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，并加入适量的溶液A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、将DNA-培养基混合物滴加至PM-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后，立即转染。注意： PM-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C、转染:

1、 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

2.、培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24-48小时。

3、PM在培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

二、siRNA 转染（以24 孔板转染为例）:

A、 细胞接种:

1、转染前一天对细胞进行转接，使转染时细胞密度为30-50%左右，且生长良好、无支原体污染（非常重要）；

2.、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B、PM /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):

1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，并添加适量的PM转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、在1.5 ml无菌离心管中加入50 ul无血清培养基，并添加适量的siRNA（见下表），用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、将siRNA-培养基混合物滴加至 PM-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15-20分钟后，立即转染。

C、转染:

1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

2、37°C培养24-72小时，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6小时可以更换培养基，但不是必须。

3、 PM 在培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

注意事项：

1、 刚开始转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8 ug， PM可选择2.0 ul、2.5 ul、3.0 ul、3.5 ul进行优化。24孔板siRNA转染，PM 用量2.0 ul，siRNA用量可选10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol进行优化。

2、进行质粒转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在80-90%为准，过高或过低均会影响转染效率。进行siRNA转染，接种细胞的数量应以确保转染时的细胞汇合度在30-50%为准。在制备DNA或siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清（推荐DMEM）。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。

3、溶液A仅用于质粒转染，RNA或siRNA转染不需加入溶液A。

4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异，不要混用同一条件。

5、 如果需要质粒稳转，请在转染24-48小时后加入筛选培养基。

6、 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染，如需质粒DNA、siRNA共转，请选用核酸共转染试剂（abs60317）。

附表 1： 质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

附表 2：siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件

储存/保存方法：

-20°C 避光保存，有效期一年，使用前请轻轻混匀。

试剂盒组成：

产品用途：

适用细胞系 ：小鼠软骨细胞，大鼠软骨细胞，人关节软骨细胞，人肺静脉内皮细胞，人脐静脉内皮细胞，小鼠肺成纤维细胞，人肺癌上皮细胞，人乳腺癌上皮细胞，人结肠癌细胞，人气管上皮细胞， 人肝癌细胞，人宫颈癌上皮细胞，前列腺癌上皮细胞，大鼠肺静脉平滑肌细胞，人肺动脉平滑肌细胞，大鼠心肌细胞，人纤维肉瘤细胞，大鼠骨骼肌细胞，人横纹肌肉瘤细胞，人胶质母细胞瘤细胞， 人黑色素瘤细胞，人神经母细胞瘤细胞，小鼠肝癌细胞，小鼠胚胎成纤维细胞等等