Westernblotting是一个步骤繁多的实验，每一步都会对zui后的结果产生影响，电泳过程是其中关键重要的一步。好的电泳能让目的条带整齐，结果图让人眼前一亮。要做好电泳也并非易事，凝胶质量在其中扮演着重要作用。电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶，该凝胶的聚合由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。常用的催化聚合方法有两种，分别为化学聚合法和光聚合法，实验室配制凝胶通常为化学聚合。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰...

预染marker易于使用–与上样缓冲液预先混合，可直接凝胶上样，无需煮沸。条带清晰–亮度类似，但颜色不同的条带便于观察。质量检测–每批次均经过SDS-PAGE和Westernblotting验证。两个参考条带–70kDa为橙色，10kDa为绿色。与膜兼容–Westernblotting时彩色条带将转移到膜上应用，监测SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳期间蛋白的迁移。监测Westernblotting蛋白转移到膜上的情况。测定SDS聚丙烯酰胺凝胶和Westernblots上的蛋白分子量。...

丝裂原活化蛋白激酶MAPK（mitogen-activatedproteinkinase）是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者，其调节转录因子和相关酶的活性，参与细胞增殖、分化、转化及凋亡的调节，并与炎症、肿瘤等多种疾病的发生密切相关。MAPK是一组能被不同的细胞外刺激，如细胞因子、神经递质、激素、细胞应激及细胞黏附等激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶。该通路的基本组成是一种从酵母到人类都保守的三级激酶模式，包括MAPK激酶激酶（MAPkinasekinasekinase，...

1.如何保存和分装抗体？对于许多抗体而言，分装为小等份在-20℃或-80℃下冻存是*的保存条件。抗体保存应避免反复冻融，分装可以zui大限度减少冻融对抗体造成的损坏，还可避免多次从同一管中移取抗体而引入污染。但是每份不应该少于10uL。分装的体积越小，抗体的浓度受蒸发和管壁吸附的影响就会越大。大部分情况下，抗体在4℃条件下能够保存1-2周。但有部分特例。为了防止微生物污染，可在抗体中加入适当浓度的NaN3。如果要用抗体对活细胞进行染色或处理，或者要用抗体进行体内研究，则不能使...

BSA试剂重金属(如Pb)：BSA试剂的基本信息，货号：A8020规格：10g100g500g1000g别名：牛血清白蛋白(第五部分)；牛白朊(第五部分)；牛白蛋白；蛋白粉；BSAV；Albumin(bovinefractionV；BovinealbuminfractionⅤ;BovineserumalbuminfractionⅤ分子量：68Kd。外观：类白色冻干粉。特性：纯度（蛋白质）：≥95%，水≤5%；均一化电泳检测。杂质：Na：BSA试剂可提高特异性的识别能力。在做w...

WB常用试剂使用可逆染色剂例如丽春红S检测转膜效果，检查转膜操作是否正确。PVDF膜需预先浸在甲醇中，然后浸到转移缓冲液中。代替5%脱脂奶粉，使用含0.5%脱脂奶粉或无脱脂奶粉的抗体稀释液，或更换封闭剂，减少封闭时间。使用新鲜一抗，重复使用有效浓度会降低。在孵育和洗涤液中加入温和去污剂如吐温-20。脱脂奶粉含有酪蛋白，该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白，会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作为封闭剂。WB常用试剂使用温和的去污剂如吐温-20，或更换封闭剂（常用的...

封闭的原理：固相载体表面(如elisa板，NC膜或者PVDF膜上等)有很多孔洞，通过电转或包被，胶上的蛋白被转移到了膜上，或抗原/抗体固定在板上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多孔洞里面，但蛋白并不是连续的，有很多空隙，而且比如说样品孔之间也有空隙，这些孔洞并没有填进东西，而抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与表面上的空白空洞位置结合，同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“...

预染marker通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加入6000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。37℃5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6～24h。按照实验具体要求，给予0～20ml干预药物处理，37℃5%CO2继续培养至合适时间。预染marker分子量范围–10种蛋白分子量范围在10到170kDa之间。易于使用–与上样缓冲液预先混合，可直接凝胶上样，无需煮沸。条带清晰–亮度类似，但颜色不同的...